请教 :关于干细胞成球实验中的换液问题和干细胞球的消化问题

火云豹

在干细胞成球过程中 要对细胞进行半量换液 文献上说的是每隔3天左右 但是个人实验经验是一周左右换液也是可以的  我的细胞浓度时1x104/ml
  r1 A& S* |* n, q: @9 x, M$ N5 C  请教大家的问题是如何在换液的时候减少细胞球的丢失率 我是用一毫升枪头尖端在培养皿中吸取上层液体 总是感觉这样会丢失细胞球 但有没有找到更好的办法 不知大家有没有什么窍门呢1 n! k9 C4 v! A0 b
, r( ]# N* X9 V
另外 我在消化球把其变成单悬液不的时候 是直接吹打的 效果不佳 上次好像听说有一个什么酶效果好  不知哪位战友有用的 叫什么名字

daviddow

我是每次在原液上加上一些培养液，3天加一次。5 P% L% n3 T/ Q% O: T' \9 Z2 B
胰酶，0.25%

jixiaoqing

我是用离心的 胰酶消化

火云豹

如果用胰酶消化的话 有可能会损伤细胞膜表面的蛋白啊 好像有比它更好的消化办法 正在查找资料 找到了和大家共享

火云豹

还有 你一旦离心的话 肯定要吹打重悬 这样不是很容易把球又给破坏了吗

norther817

很有意思的问题！; h% c$ V6 R7 \! h0 u2 S
! B8 V8 Z2 Q( P0 N( O
这是一个设计到干细胞球换液和传代的问题。/ w3 t" g' [, w; ?* e1 i4 Y2 y
$ [9 ~; ]/ ^+ p/ k% w
先说干细胞球：不同细胞来源的干细胞球其形成球的速度、大小和致密程度是不一样的。即可分为紧密球和疏松球。疏松球球内细胞结合松散，吹打即可使之分散。所以单纯换液，建议根据生长速度，3-4天添加新鲜培养基即可，根据球大小传代，一般球直径不宜超过200um。对于紧密球，吹打往往是无效的。换液方法可以直接加液 也可以离心换液。 同样紧密球直径也不宜太大，建议150um时传代。方法1：离心后胰酶消化+吹打。火兄分析的对，胰酶消化细胞膜表面的蛋白是有影响的，所以分析前尽量勿用。另外提到的另一个酶是Accutase，挺好的。 , o* l- T3 _$ `9 ^+ X
方法2：机械分割。将细胞悬液经细胞滤器滤过同时分割球。我们基本采用这种办法。
& y. r# A& u5 N3 U# [) X相信以上方法对各位可行有益。

火云豹

目前已经订购Accutase 400多元 100毫升 是invitro的

下雪了

请问这种酶有什么好处呢？不会对细胞有损伤么？谢谢~~

shy1223

为什么没有下文了？计算干细胞成球率具体方法是怎样的？是怎么计数的？用什么办法鉴定我的细胞就是干细胞呢？成球的细胞传代是直接把球挑出来还是一起传？传几代后细胞会不会变性了呀？

shy1223

回复 火云豹 的帖子
, c! ?% z) Q" P9 ~; R. E  `3 w0 h4 ~0 T( P# g  ?6 o- h
为什么没有下文了？计算干细胞成球率具体方法是怎样的？是怎么计数的？用什么办法鉴定我的细胞就是干细胞呢？成球的细胞传代是直接把球挑出来还是一起传？传几代后细胞会不会变性了呀？