细胞生长曲线如何测定？

sniper

求助：细胞的生长曲线怎么测定，哪位高手提供一下详细步骤

sarah19860420

回复 sfk06 的帖子4 g2 O% a1 B0 i. W) i
# H/ t7 C+ v# {. G
恩，谢谢。O(∩_∩)O~

sfk06

回复 sarah19860420 的帖子( Y& E/ Y  m( y: T# v
; W6 T$ M4 e" @% j
一般是经过特定的天数，如经过12 24 36 48 60 72 等小时候细胞的密度

he_liang

回复 sdjjfangfang 的帖子% t% C" E+ z7 `( E9 }! B
: ]) V6 i, L0 ~' R, Y. I5 J1 I( |
恩！谢谢！

sdjjfangfang

回复 he_liang 的帖子
  s" V, w3 z) s( S& P9 M" ^
! ?  l* }; L! k1 j. k- ?0 Z& j- o对于细胞的密度应该考虑细胞本身的生长，如果细胞生长较慢，你又希望得到S型的曲线，则起始密度应该大一些。一般建议在实验前，进行密度的摸索。

yyyan126

生长曲线测定方法有三种，第一种:直接计数法，我们测生长曲线时采用每天计数，共计数10天，即按照细胞生长速度确定接种密度接种10块24孔板，每块24孔板接种3孔，每天拿出1块板进行计数，细胞要定时换液，汇总数据后进行生长曲线绘制。第二种：MTT方法，采用碧云天的试剂盒进行操作。第三种方法，采用CCK-8方法，采用碧云天试剂盒进行操作。
+ c2 J% ]* T) N. J6 j0 KMTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。5 b5 ~7 h8 J5 h8 M
CCK-8试剂中含有WST–8：化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
! i2 O% N4 U$ j2 s& sMTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8产生的formazan是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。

新疆八钢

回复 sniper 的帖子
; J5 Z  e9 y3 Y6 C6 z! r
2 a8 v2 m6 }" |5 n' k细胞计数法是检测生长曲线的标准方法，试剂盒测试时替代方法，必须在已知标准生长曲线的基础上才能应用，或者生长曲线预实验的时候测量。如果实验室有细胞计数仪是最好的，如果没有细胞计数仪，那只有付出体力了，呵呵。
% P% B0 k) \  J+ E3 H一般采用24孔板，细胞密度2E4/ml（根据细胞生长速度调整接种密度），三个复孔，连续测量6-8天。

huangcong1988

回复 lixiaodong 的帖子
+ V0 e, Y' x" H; h3 M
/ w; X4 j4 x9 z0 d# ^. n! F求文章，谢谢

sarah19860420

回复 sfk06 的帖子
8 \4 c& j% {/ I- `  d+ i, ~. M" N$ `4 I) W! l
您的每隔一段时间，是特定天数，还是细胞达到一定密度后确定的天数？而且您做的这个生长曲线貌似持续很多天吧。我现在想测定3株细胞的生长曲线，但是，这三株细胞总是不能在同一天达到full confluence。这个时候要怎么样处理细胞比较合理呢，是等细胞达到一个full confluence再传代计数，还是在隔三天或者5天九统一把细胞处理了呢？谢谢

sarah19860420

回复 hdc2001 的帖子3 U+ Y  C% |0 g9 X+ l9 z  ~
% n. b) q0 A) [* ], I4 W7 N
请问您接种细胞的时候是直接接种18个瓶？中间不传代？