细胞生长曲线如何测定？

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生长曲线测定方法有三种，第一种:直接计数法，我们测生长曲线时采用每天计数，共计数10天，即按照细胞生长速度确定接种密度接种10块24孔板，每块24孔板接种3孔，每天拿出1块板进行计数，细胞要定时换液，汇总数据后进行生长曲线绘制。第二种：MTT方法，采用碧云天的试剂盒进行操作。第三种方法，采用CCK-8方法，采用碧云天试剂盒进行操作。
& L7 L# {- v1 L$ k2 \+ d6 PMTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。( q9 q5 P/ v/ j% i2 U3 v. R
CCK-8试剂中含有WST–8：化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
; D; E% {* d1 H  vMTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8产生的formazan是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。