改进的细胞冻存方法

懵懂干细胞

前些日子在生物网站上看到的方法。分享给大家！希望对大家有所帮助。 细胞冻存方法的改进.doc (71 KB)

2010-8-5 21:40 上传

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mmssyyee

感谢分享。。。

lunyuyuanxj

谢谢分享

Temin

6 \1 Q* U0 Q7 {4 H+ e+ u* c! h

有很多有经验的老师喜欢把细胞冻存管放在异丙醇中冻存，利用异丙醇的自身梯度降温的特性也能达到很好的效果 ...
! f8 N& Q. W; A" |& i* E古雅森林 发表于 2010-11-10 19:46

0 J. W( q2 Z5 Z$ W! X+ l& G
一种方法是把水浴锅跳到39度～40度，晃动快速解冻冻存的细胞，注意冰块消失后立即拿出水浴锅，用酒精棉擦一擦，然后把细胞从冻存管里吸出，加到到已加好10ML预热Medium的15ML离心管中，颠倒混一混，然后台式离心机离心1000rpm，5min。弃含DMSO的上清，细胞沉淀用新鲜Medium重悬，在Dish里面培养。* J) U5 i) T6 y, y: q! z5 e7 q
这是通常的去除DMSO方法，但是一般细胞状态好的话，DMSO不会造成什么影响，有人觉得离心会对细胞造成损伤，所以在细胞解冻后，直接加到Dish里面培养，不离心去除DMSO，待4-8小时（或者培养过夜）细胞贴壁后更换Medium即可。
) S; q5 |( t& `6 q+ \, [
( [. ?5 E3 p% P: J1 b$ c. z对于冻存细胞，我还是觉得有条件的话，使用细胞冻存盒，注意每5次更换异丙醇，这样每次冻存细胞的条件一致。而且，这样冻存条件能保证高达95%-98%以上的细胞存活率。

nculsa747

回复 19# 古雅森林 7 n( y: }1 h1 b/ [+ k+ \; s" Q' `
+ A; b$ G: B5 \" t

# W7 u9 }6 u2 ~4 I( M& @解决的办法就是：在常温下尽量减少细胞与其接触的时间。冻存的细胞液装入冻存管后立即放在－80度冰箱。

懵懂干细胞

回复 32# nculsa747
9 g4 @  {8 p* ?其实这个方法在国内也一直用着，现在大家不差钱了就不用这方法了！
) @% i# P- m  c* ~$ L不过我个人认为这个方法用于应急应急还是可以的！

nculsa747

咱不差那一点钱！如果日后复苏不成，耽误了实验进展，岂不糟糕！就在昨天，师姐有几盘PLAT E，传代后还有5ml细胞悬液没有用，我说丢掉算了，反正它长的快。师姐说还是冻上吧，不然多浪费。当时异丙醇冻存盒还在－80度冰箱里，于是就用两块泡沫盒扣起来放在-80度了。复苏效果有待验证。不过，其它几个实验室有这样做的，说是复苏效果还可以。

wanghuantjmu

谢谢。来看看

大笨鸟

谢谢分享

dengyuan9

直接用冻存盒岂不更好。