SD大鼠骨髓间充质干细胞的培养心得——求交流、指证

糖糖背着行囊

本人养此细胞经验3个月，一直用的贴壁法，成败均有，现将自己目前觉得有用的TIPs记录下来和战友们交流，不正确或者片面的地方希望战友诚心指证，希望能互相帮助，共同进步。
2 w. v) @7 o# p1 X1、2w大的大鼠养出来的细胞形态最好看，一边的股骨胫骨可养一个大号瓶，即一只养2瓶；2 I+ X; m" K9 I. v
2、原代培养24h时必须全换液，换液时不用pbs洗，只是把培养液换过就行，否则杂细胞会很多，影响贴壁细胞的正常生长，之后2~3天换液；2 v. {! L3 T# ~
3、10d左右传P1，用差速消化法消化，1分钟即终止，根据消化下的细胞量1传1或1传2（中号瓶），这样梭形贴壁细胞的纯化度很高，之后3d换液，长势好的话5d左右就能传P2了；
1 M$ ?$ U# T2 u) H8 O  s5 r# F4、细胞量太少的话，肯定长不好，即使好容易长起来了，都会有脂向分化，或形态不佳的情况，所以一经发现传代、复苏的细胞24h时贴壁细胞太少应弃用，不要再浪费培养液；$ N+ F! O6 a4 w! ]5 L
5、成骨诱导时，会有细胞因为长得太密而死亡的情况，在培养板底部会观察到白色星网状的沉淀物，该沉淀物贴的很紧，胰酶37°C消化10分钟都不会消化下来。

糖糖背着行囊

今天成骨诱导21d做了茜素红染色，茜素红染液的浓度网上查的是0.1%，95%乙醇固定，我配的1%，4%多聚甲醛固定，染出来的结果颜色偏紫红些，有些有点橘红的意思，但不是文献里的橘黄色

wsrz

学习了，谢谢分享

bingo

和我们的经验差不多，细胞太少的话可以几瓶合一瓶，长着长着就长漂亮了~~

why121

能介绍下接种密度吗？大鼠是否比小鼠的MSC容易做出来呢 请指教

why121

能介绍下接种密度吗？大鼠是否比小鼠的MSC容易做出来呢 请指教

糖糖背着行囊

二维传代一般是5*10的4次方每毫升，三维支架接种的话要10的6次方级每毫升。. T# H7 q# ^8 D; E! N
大鼠和小鼠的比较，我不清楚，一般认为骨髓MSC都比较容易养出来。
& g/ c  H  I' b' g不过话又说回来，养细胞还是存在运气成分，血清好不好、培养基好不好、器械消毒、超净台条件、孵箱条件、冰箱有没有停电，等等等等，影响因素比较多，运气好就每个环节都不出问题，运气不好就一点小问题都能影响最后结果。容不容易就见仁见智了。