奇怪，神经干细胞消化后传代后细胞都消失了？（附图）

liyong7732

培养NSC比较费钱，你要用B27培养，或者N2，消化时候有sigma的复合酶，好像是蛋白酶+木瓜蛋白酶+？？酶， 忘了 ，你查找一下，这种酶消化温和！胰酶用的浓度太大，建议稀释到0.125或0.1% ，用血清中和后可以离心洗涤一次，不会影响太大，NSC本身在干细胞球中的含量就很低！祝成功

dulaiyouyu

回复 10# xfyang2007123
8 C3 A# a5 a7 p8 v; ~) y5 G
8 H( w( J5 I: C/ o' s. G3 e: Q6 L6 i* A: }
    试试用木瓜蛋白酶吧。比胰酶温和多了。然后用PBS漂洗就可以了。

sfk06

或许可能与离心有关，所剩细胞太少不足以维持细胞生存环境。疑惑是某个环节的突然变化。你操作过程中有没有出现和以前不一样的事情？？？

jason

你的培养的神经球还是不错的，说明培养基没有问题。但因为是原代10天的细胞，神经干细胞比例还很少，神经球还很松散，是很容易吹散的。% o& {6 @9 x/ j8 [- M
如果传代两三代后，神经球就很紧实了，用普通的吹打很难将神经球吹散，所以要用酶消化。但千万不能用胰酶，胰酶消化会导致绝大部分细胞死亡，死亡的细胞释放的物质会导致其他活细胞都死掉的。换用sigma或invitrogen的accutase吧# y# H/ M( `/ Z' z
还有就是前几代培养是不要半量换液，全量换吧。因为这段时间很多非神经干细胞逐渐死亡，释放很多炎性因子等会诱导神经干细胞死亡。

xfyang2007123

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回复 7# exin11
0 V3 Q% @5 z+ u# ?- ?9 B0 Q谢谢建议，很多方面确实容易出问题，就只能挨点找原因了。另外我们这里的离心机是较老的那种，500转每分一个档，所以调不到900啊。

xfyang2007123

回复 6# dulaiyouyu
7 f5 Y4 w3 z) M! t. c, J我离心完后在显微镜下看了，还有干细胞球的，所以应该不是离心的问题吧。

xfyang2007123

回复 4# rhmm + {% X! @; f. g* d  d1 T3 N4 |1 p# F
我用吸管直接吹打时，干细胞球分散不开，所以就用胰酶消化了，您是用的吸管直接吹散的吗？因为看很多文献上都是半量换液，所以就采用了。

xfyang2007123

回复 2# uyunbilig / V; l* P; j: U. W- o6 o" q* E
谢谢，我试试您的方法看吧。

exin11

胰酶处理，消化过度，没有终止消化……都会导致细胞碎裂！
9 s  E3 ?% P$ S  L/ ~1 @" ]再者，离心转数可以再低点，900转4分钟。8 f7 R, `, [% ?
不知道你的换液与培养环境怎么样？

dulaiyouyu

你的原代的神经球是没问题的，传代时，可能是酶消化过度，建议使用比较温和一点的酶，不要用胰酶啦。也有可能离心的时候出了点问题，会不会沉淀里只有碎片，活细胞被你弃掉了呢？