请各位高手指点

zhang_tao1985

养了骨髓间充质干细胞，用的是4周龄大鼠，取的双侧股骨，用全骨髓法培养的，24小时全量换液，然后每72小时换液一次，5天之后的细胞是这样的
$ |: p, g; l  I$ N1 A, X5 u7 u  J* F) N$ A: ?& [
但是到了第11天的细胞是这样了，师兄说大部分已经死了
  ~9 i* f2 P. K8 `8 I4 x2 _! \4 ^
/ F4 p2 k9 O9 D" p' N应该是7天就传代了，但是那时没有长到80%融合，所以请高手指点  F3 ~$ p  {  Z
用的是10%FBS的DMEM培养基，每瓶加入5ml左右/ ]: r# M7 M6 n% N6 g! J, E4 B
感谢了！

exin11

回复 9# zhang_tao1985
' |: O8 A- i4 Q$ x* f3 g1 r; {) q0 h3 ~

9 L1 c" c4 g9 X5 u$ m' L0 c# S    ok

zhang_tao1985

回复 7# exin11
; I2 u  h8 i( i4 a: v是全换的，呵呵，现在新养了一批，到现在长的还算不错~这次应该是处理的比较快，骨髓的缺血缺氧时间比较短

zhang_tao1985

回复 6# lchanlon
6 M  x5 W$ ~2 Y: X# N是t25的瓶子

exin11

回复 4# zhang_tao1985 ) w; m4 g% U8 |' r! A
2 ?  `" F2 ?3 K
& i( ]* I: s: @% m0 H* P
   是全换液？刚开始四分之三换吧

lchanlon

T75你加5ml的培养基会不会有点儿少啊！

zhang_tao1985

回复 2# lchanlon   t* M* e2 B5 Y" R& P1 f
$ M# {' ~7 E0 k" T7 D$ q$ `, \
是啊，这个和瓶子还有关系？

zhang_tao1985

回复 3# exin11
  \: t$ h2 E2 K. s除去消毒过程之外，倾斜培养瓶，弯头吸管吸出培养基，然后分三到四次沿着侧壁加入4ml左右的培养基，然后直接放入培养箱里面了。谢谢~下次我去试试FBS高一点的培养基的培养效果。

exin11

你把换液的过程说说，不知有没有失误。  10%的FBS刚开始可以高些，可以13%。到后来再减下来！

lchanlon

你用的是T25的瓶子吧，