请各位高手指点

zhang_tao1985

养了骨髓间充质干细胞，用的是4周龄大鼠，取的双侧股骨，用全骨髓法培养的，24小时全量换液，然后每72小时换液一次，5天之后的细胞是这样的
8 B: R2 ]% o2 `. r3 z( G
# i% u* @! i4 L! z4 V5 M! y但是到了第11天的细胞是这样了，师兄说大部分已经死了
, |$ K9 ?5 b  f  T; r% E  ?+ n# f' l
应该是7天就传代了，但是那时没有长到80%融合，所以请高手指点
* I. v0 B8 r$ r用的是10%FBS的DMEM培养基，每瓶加入5ml左右/ L9 u' A  q8 N# l; N
感谢了！

lchanlon

你用的是T25的瓶子吧，

exin11

你把换液的过程说说，不知有没有失误。  10%的FBS刚开始可以高些，可以13%。到后来再减下来！

zhang_tao1985

回复 3# exin11 7 a- b! n/ H- S0 o# `8 I
除去消毒过程之外，倾斜培养瓶，弯头吸管吸出培养基，然后分三到四次沿着侧壁加入4ml左右的培养基，然后直接放入培养箱里面了。谢谢~下次我去试试FBS高一点的培养基的培养效果。

zhang_tao1985

回复 2# lchanlon
/ F9 i5 ?9 |& J4 ]6 U, E( p7 t
! s  V' N+ w  F" |, k2 b+ Z& i是啊，这个和瓶子还有关系？

lchanlon

T75你加5ml的培养基会不会有点儿少啊！

exin11

回复 4# zhang_tao1985 3 E' X& A% d1 c' @1 o
; u0 S9 G3 ?7 r7 t, U/ L

4 |  j# |9 M4 ~) [2 s   是全换液？刚开始四分之三换吧

zhang_tao1985

回复 6# lchanlon
+ J3 e" [: E- S" y; `7 g: v; q是t25的瓶子

zhang_tao1985

回复 7# exin11
, E5 I/ D/ w( e3 ]; x: V是全换的，呵呵，现在新养了一批，到现在长的还算不错~这次应该是处理的比较快，骨髓的缺血缺氧时间比较短

exin11

回复 9# zhang_tao1985 9 h6 t1 l+ _+ ?( n6 M
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    ok