胚胎干细胞的分离培养

hhchen418

请问谁做过小鼠胚胎干细胞的分离培养？
$ ~+ x: t. L7 V( O本人从延迟发育小鼠的桑葚胚开始培养，在进行原代克隆培养时，消化生长出来的细胞团块，结果发现用0.025%的胰酶无法将其消化成单个细胞？原因不知出现在哪？烦请有经验的通道指点一下！

cony

0.025%?胰酶浓度是不是太低了。。

zpzp0312

确实有些低啊！
2 {( C/ J8 ^% O  S' l建议用0.05的

tangxiao

印象中，好像是在显微镜下挑取吧，具体也没做过
% M, b4 b$ h3 w) L" O给你个网址吧，里面有  http://www.jove.com/

lfate

加机械分离法

hhchen418

同意Ifate！我猜测可能还得加机械分离法。但对于小鼠ESC，我们用多大直径的转移针来分离好呢？我看到文献上用到了3种口径的转移针，但文献未提供具体口径，所以很茫然啊，希望前辈多多指教！