BMSC的MTT数值不理想

小熊不杀生

最近做BMSC的MTT，但是数值总是在0.3-0.4之间晃悠，空白孔是0.03-0.05之间，重复两次了，曲线没有明显起伏，但是镜下观察可以看出细胞增长比较明显，细胞数目也尝试过1000个-8000个每孔，都没有改善，不知何解？有前辈说：在吸弃培养基时有丢失结晶的可能，导致数值下降。但我个人觉得BMSC贴壁效果不错，还请大家帮忙找找原因

小熊不杀生

还是希望寻求MTT测生长曲线，CCK-8暂时不用

angel-sakura

) K8 @8 t- g4 Y- M/ Q+ s这个是我做的MTT生长曲线。。。。0 u, }4 C" k' a; f
估计是你加96孔板的时候细胞不均匀造成的吧。) A1 ]/ `! ?2 r( c0 S( p+ o1 j
最好还是详细的描述下你做的过程

babyzeng

请你把实验的具体过程描述一下，包括试剂品牌，加了多少液体，作用多久等等。

小熊不杀生

回复 3# angel-sakura / e( Y2 k" v, o3 o8 j" K) [

, K3 h- ?8 ~0 r. s; i! Z4 c
% C6 ?9 P6 }3 U9 [- a- m0 K2 p4 x   谢谢，看了你的图，不知道你的细胞是不是BMSC？你用多大波长测得？我的是每孔4000个细胞，MTT20微升，4小时后吸弃培养液，加入DMSO，都是常规操作，但是镜下能看到细胞生长趋势，OD值却不明显，我用490nm测量OD值

小熊不杀生

对于96孔板的均匀问题，也很头疼，我在加细胞悬液（每孔100微升）的时候是贴壁加入孔内，然后晃动板子，避免细胞聚堆，最后加完每块板后，再顺时针或逆时针拍打板底，但是还会出现细胞往四边跑的情况，可能OD值不理想主要是分布不均引起的？

angel-sakura

回复 5# 小熊不杀生
9 A/ F* b' l/ w; J  ^# X' U
5 W: {3 ^; b! E/ D  Q; g$ T
. E5 e4 Y6 b) j8 Y    波长不记得了，我用的是双波长的，我用的是mBMSC，其他的和你相似，不知道是不是你弃上清液是出现了损失

小熊不杀生

回复 7# angel-sakura
5 `1 {7 \6 s" R' \6 H0 @5 l  K* q/ x' l
6 z" d( J- G1 S3 t
    也可能，所以这次打算用滤纸倒吸了，如果结果理想的话，上来再和大家说说经验

angel-sakura

回复 8# 小熊不杀生
' F2 ?" u1 U$ h8 G3 @; c2 R$ w- O% W" R+ L, ^5 \! g; E. _3 z
3 [' }' g4 C( Y) n/ P) a- I
    额。。。。你一开始不是用滤纸吸的吗。。。。直接倒的话肯定会有损失的。。

小熊不杀生

回复 9# angel-sakura 7 ]. r" [( t9 }- g& m2 Y

# o! _5 v$ b  F4 y. l5 O. c5 @  M. M% u: F- G5 B
    我是直接用负压吸弃培养基的，滤纸倒吸没试过呢，现在细胞还在培养中，不过对于滤纸倒吸我有个疑问，会不会有培养基的残留？残留会不会对最终的OD值有影响？