microRNA研究问题

非我

从基因组克隆microRNA前体有什么原则和注意事项啊
3 o. y: [5 R- C/ C$ i* P哪位高手指教一下

exin11

2010-9-12 20:14 上传

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hljzyydx

这个要注意的问题很多# w' V9 P. J: |8 i. t. I
1.看你要插入miR的哪个部分，是Pre还是Pri，这二者是有区别的# F( A7 L: f  [8 ]8 N
2.你也可以直接插入miR,但是不确定是否一定会表达（建议使用病毒载体）
" k* B: a* P) D+ N9 a! l3.确保种子序列一定在目的片段内，这个就不必多说了: R. n# @# I* i" m. [7 P% Y9 i
4.loop环的处理比较麻烦，你可以参考公司的建议或者根据已知文献自己设计
4 W" a. A: [: m( y) r我能想到的大概就这样吧，呵呵

hljzyydx

哦，对了，构建成功后一定要用Qpcr检测一下miR的含量，以确定是否可用

jmsjms

不同的microRNA可能要注意的事项不一样的。
& l& u$ u. c$ [8 J% M大部分microRNA，你可以克隆pre-miR(约100bp)+前后各200——300bp的序列直接放到CMV等PolII promoter后，polyA前，或者是放到GFP后，polyA前  }  y: G/ v+ g! H# E# j% J
可以参照这篇文章
% L! W2 k7 P+ I, QMammalian microRNAs: experimental evaluation of novel and previously annotated genes
- r* @- a" p; p1 J: @. _回复 1# 非我

bigchock

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