Peprotech公司的EGF,b-FGF生长因子如何分装？

huangfei2010

大家好！
$ V' ^0 x. Y$ _' t, _! G- k7 f    小弟第一次养神经干细胞，买了Peprotech公司的EGF,b-FGF生长因子，但是现在对于分装有一些疑惑？请问大家是用双蒸水溶解吗？分装的用什么缓冲液啊？说明书上说用的事0.1%的BSA，请问大家这个BSA对于无血清培养的神经干细胞有影响吗？网上好多人都是用直接用双蒸水直接溶解分装，或者用细胞培养液溶解分装，这样可以吗？谢谢大家指点

深海寂寞鱼

to huangfei2010：
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# ?( m( ?" j. A0 _   直接用培养基溶解就可以了，然后按你需要的量分装，然后－20 oC保存。3 m) R4 c) S' b, H

& L9 l8 q  t5 O6 M9 \1 l   我们实验室买的是1mg／支的包装。一般是用1ml的培养基溶解，然后分装成10ug／支。这样一支加到500ml培养基里终浓度刚好是20ng／ml。
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   当然，也有实验室是直接往培养皿或培养瓶里加，那样的话你就要再稀释一下，然后放在4oC，用的时候按需要的体积直接加到培养皿或培养瓶里。

zhaokun826

学习了~~
) x, e* m( e) ^; H) A不懂哦~~我是按说明书上0.1%BSA分装的。。。全部弄在一起了' u+ _3 j8 p6 y) q4 ?: @3 ~) p# G
楼上的方法好啊~~

fjmedzengyue

谢谢，正犯愁呢
( H& b: e, ?8 j" ^

cookiezhang

回复 huangfei2010 的帖子) c' ~/ o: i; C0 o, @0 P% h0 q
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你好，我现在也遇到这个问题了呢，说明书上两种分别用TRIS和WATER溶解，然后用含BSA的溶液稀释保存，这个BSA是哪种啊？你们后来是怎么做的啊？能仔细说一下吗？谢谢！！！！！！

郭少爷

用tris溶解~~~

huozhicb

回复 huangfei2010 的帖子  p2 a' O& A+ w3 p0 S- E6 G* W
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你好，我用的是和你一样的因子，是按说明书推荐的方法分装的，但是养的细胞一直不大好，正在找原因，我也注意到稀释液里痕量的BSA可能对细胞产生影响，所以想问下你养的细胞怎么样？请尽快回复，谢谢！

OBGYNob

正好需要，万分感谢...

daviegao

PBS +0.1%BSA 即可。或培养基代替PBS。

jjxsd1986

Peprotech的EGF第一步要求是用Water来重悬的，即离心过后用高压灭菌过的双蒸水或三蒸水(最好不要用去离子水，偏酸性)溶解，bFGF要求用5mM，PH7.6的Tris溶液重悬(不同批次的有可能会有不同)，可以用移液器吹一吹加速溶解，重悬好之后用含有载体蛋白的溶液(比如含0.1%BSA的PBS或含10%血清的DMEM之类的)来进一步稀释一下，再分装冻存到-20度或-80度就可以了，避免反复冻融。
' @* @/ |, n1 D) D" o0 ?  ?其实第一步重悬用的溶液很关键的，要求用水就最好不要用PBS之类的，而且PH对于细胞因子的活性也是很重要的，之所以加Tris碱溶解也与其PH有关系的，运气好的时候随便加什么溶液都可以溶解掉，但有时候加了PBS进去甚至都溶解不掉，所以最好严格照说明书操作。