慢病毒感染细胞后会不会随着传代而复制？

sidalin301

大家知道慢病毒是复制缺陷性病毒，那慢病毒感染细胞后会不会随着传代而复制？# K' m) D6 x/ t) J, m- p
如果不会，随着细胞的传代，慢病毒阳性的细胞是不是越来越少？
0 ?7 m& ^+ g4 }$ [4 A  y/ t最近看到有些文献报道说筛选建立慢病毒阳性细胞系，我感到很疑惑，所以在此问一问高人，请指点一下，谢谢了！

jiays

慢病毒感染目的细胞几小时后就死掉了，由于其嵌入宿主细胞基因组的能力非常强大，所以慢病毒感染后类似稳定转染，但如果你转染的基因是抑制增殖的，随着细胞传代的增加，转染阳性的细胞由于增殖能力低下会被增殖快的未转染细胞给稀释掉。所以在ips的诱导中，慢病毒质粒也标记了抗性基因G418，达到稳定转染的效果。
& T: M) S3 j2 M/ C( ]  U6 S  I注：慢病毒一般称为转导细胞，质粒脂质体为转染，上文中用转染系顺口言之，写文章时一定要写成转导。

sidalin301

回复 2# jiays
1 Y- W1 c( ?( A+ w# ^; a    多谢这位高人的指点！

sidalin301

  h* s. i& t6 X

+ o1 m% d/ z6 }& c# P9 V. z+ Y回复 2# jiays 6 o8 k9 n! a" p; w  _
& w3 I# n# E& V: P% i% ]( _
再请教一个问题，在测定慢病毒的滴度时， 根据下面的计算公式来看，每一个GFP+ cell里面是不是就只有一个慢病毒？会不会有2个或更多？如果是这样那这个计算公式
+ [/ T( j, u' R5 |/ j/ B是不是就有误差？' K+ D* ]3 y2 ~, k( {
有一个公式“TU/µl= (P × N / 100 × V) × 1/DF, where P = % GFP+ cells, N = number of cells at time of transduction , V = volume of dilution added to each well and DF = dilution factor ”。

sidalin301

我的QQ939112256，期待高人的指点！

jiays

我们一般不测定病毒滴度，直接用包被了病毒的293T细胞的上清液（过滤除菌后）加入到要转染的目的细胞培养基中（1：1----1：3），6h后换液，24h后观察目的细胞的GFP强度，达到90%以上，即认为病毒包被成功。

sidalin301

回复 6# jiays ' P6 J* F6 x# ]7 V
' B+ T* X6 Q  h7 G  j! z1 r) G9 J
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    感谢！

dengyuan9

感谢

王乾

慢病毒是随机整合到基因组中的，细胞分裂时会随着基因组的复制而复制，如果你的细胞是纯的即感染效率100%，理论上不会随着传代而慢慢减少，但如果不纯，被感染的增值较慢，是有可能越来越少的。

maozhuxiwo1

学习学习····