求助：小鼠体外受精

xmliuj

请问做小鼠体外受精，有几个问题需要请教：
+ o. L4 M9 L7 J: z) j% c7 Q$ O1.精子取出后在HTF获能需要多长时间？一个小时吗？0 c' M( X3 ~  }! S7 a, Z
2.卵丘复合体需要用透明质酸酶处理吗？, G. _; }7 R1 }" C5 [6 N- O5 G
3.卵丘复合体取出后立即放在获能的精子里受精还是卵子也需要成熟一个小时再放在获能的精子里呢？3 O) P3 U4 ]' b/ Z" Y, X# g* }7 n
4.是把精子放在卵丘复合体中呢还是加卵丘复合体在精子液滴里呢？
( o$ k4 M) q5 w谢谢大家了。

POPOLD

很容易  有protocol

xiangchou812

第一个问题，我觉得适当处理一个也是可以的，就像做牛的一样，可以上浮法取上层精子。( w# u, F% r7 \" u& F
第二个问题，COCs对精子入卵是有帮助的，所以没必要去除。
5 s: K; A! a9 c' W; t第三个问题，一般来说我胶都是超排后由输卵管中获取COCs，这已经是成熟的卵母细胞了，完全没有必要再行培养。
+ {7 o+ m" k+ \+ e第四个问题，一般我们都是先取精子，然后放到培养箱中，然后再取COCs，再将精子放到卵母细胞中。

chijun

做ivf的时候主要的是要看精子的浓度与活力，如果说是处于性成熟期的野生型小鼠，基本上可以做到78成左右的受精率
4 f8 n! n2 U2 }' P6 S' d还有一点就是在你处理卵的时候很重要，最好是不要用透明质酸酶，这样可以减少对卵的损伤，还有就是你用的玻璃吸管口径要稍微大一点，以免挤坏。
( w  A, ]# U7 U- S基本上我们这里的操作是，先预热HTF 过夜5 @. j$ u6 |0 @- ~
然后早上先取附睾及输精管里的精子，然后吸到htf的悬滴里面，（尽可能减少组织的带入）一小时
  H4 Y2 D9 L5 L* Y然后取卵，将卵团等吹入装有精子的htf的悬滴里面
8 B$ y3 w! X6 l, W5 E; W' u下午4点，将卵吸到干净的HTF里，等到第二天受精情况
+ w, G' H  _; D) X+ L% |
7 d, c+ H. g/ Z7 w& ^5 r

POPOLD

好好

chiangmax

建议到MIILIPORE.COM去搜索一下HTF，你的另一个帖子里已经有回答。

xmliuj

回复  xmliuj
' V/ e. m" o- C3 t; C2 K7 Z/ H, p' {  i% l) ~
1，小鼠的一般不需要获能处理
; z; T& L! M# R5 Z8 q2，如果你认为需要酶处理，建议仔细看看顶体反应的定义4 O6 G1 \& |0 |" ?8 ^
3 ...5 i8 @0 P! `( Z6 v
chiangmax 发表于 2010-9-20 08:48

' ^+ {! s/ y8 ?7 W) ?* Y

. S5 D" ]" Z. Q# n, M( {1 s请问您的HTF中BSA的浓度是多少？我的是4g/L，这个浓度适合精子获能和受精吗？

chiangmax

回复 1# xmliuj 5 H6 D# A2 z9 ~3 f" L% R
: i/ l' Y* S) I# ?! }* W
1，小鼠的一般不需要获能处理# k7 H% n& G! [* l- Z! [
2，如果你认为需要酶处理，建议仔细看看顶体反应的定义
) n8 j# `# J6 w9 I3 [0 ]3，小鼠COCs不需要像人的卵子那样需要在体外再培养一段时间，因为人的COCs是排卵前穿刺获得的，而小鼠是自发排出的卵子，已经成熟
' X* |% b( D. `1 T. s2 r) q/ W4，一般情况需要先取COCs，然后再加入精子，当然偶尔换一下次序也问题不大