请教转基因小鼠做组织化学时灌流问题

jianlindunev

新生转基因小鼠做组织化学检测，要求要进行灌流，请问如果操作，请各位老师指导。如果从小鼠左心室-主动脉灌流，心脏组织切片中有灌流针的痕迹，非常不好看，请问有没有更好的方法。
* t: a8 |7 p; Q4 t; D# e谢谢！

瑟瑟狼

呃。。。差点忘了。。。是要PBS先冲洗血管。。。

瑟瑟狼

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& q( `. T0 P. U- {  d; L* ~5 p  Z* S这个叫灌注固定，也就是在动物活体时将4%多聚甲醛固定液灌流到全身。。。
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灌流针从左心间插入，一般深度到达左动脉弓为宜，此时隐约能明显看到针尖在动脉弓的位置，为了方便固定，可以用小号止血钳夹住进针位置，打开灌流器（蠕动泵之类），调节流速（这个值一般靠经验），开始灌注
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( u- [) e$ L/ K+ N待小鼠快变成很“气球小鼠”之前，其实很快，也就打开灌流器之后三十秒不到，可以观察灌流器工作阻力明显增加，剪刀剪开右心包，让灌流液流出- @* ?6 A; l  y  \

% n# T3 Y6 C1 ]8 y" ^, R1 U期间会观察到的现像，四肢抽搐，鼠尾先翘起后僵直，肝脏颜色变浅，鼠口鼻中有白色泡沫涌出，肠道颜色稍有变化，但不是很明显，要仔细观察
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+ G  L9 I% r' k4 R6 ]( F+ \/ a判断灌注效果好不好的标志是; x/ @( r% ?! j$ z9 \
鼠尾僵直；肝脏变成浅色，有的人直接描述为发白
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决定灌注质量的额外因素8 G& C/ ~# h. O  r" K0 w. k: @$ f
小鼠麻醉剂量要合适，不能让它麻醉过量；剪开胸腔前做好关注准备，剪开之后立即操作
! j6 H  q  n" J& D1 p中心原则：一定要在灌流液进入之前，保证老鼠存活，血液循环畅通7 u& T2 a% R% C4 Z
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我很水，希望各位牛人批评指正) a: s* J2 ?4 L6 R% k/ {- y

6 ^2 z' G4 h. s# P( z如果要保留完好心脏，则可以绕过左心尖，直接从主动脉弓进针，可以直接将主动脉弓截断，伤口进针，下口止血钳封闭，灌注差不多时，就不用剪开右心包，直接打开下口

绿雪

谢谢分享

shewawa

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0 _& |0 q3 @# j. |" k回复 4# qiongyacc
" S- s2 d- t6 H; j- F- i
: Z+ a3 Y! s# m2 R# v3 _" S是不是还需要剪开主动脉之类的吗？否则灌流液会没有出口，估计能变成气球小鼠吧。。。
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# {$ _- q9 f% S, V+ [能不能顺便请教下，那个灌流的针头插入多深 才好呢，我的总会出现肺部的水肿！

jianlindunev

非常感谢

qiongyacc

要取心脏不需要灌流吧？直接取了之后再固定就可以了吧！学习一下啊！！

qiongyacc

小鼠麻醉后剪开胸腔暴露心脏，用20ml注射器（尖端用血管钳弄钝，避免刺破心脏或主动脉）从心尖插入至升主动脉，用血管钳固定针尖，然后用生理盐水或者pbs快速先冲洗，然后用4%多聚甲醛缓慢冲（用注射器就可以了），灌流只是临时固定以便取较脆弱的组织如脊髓和脑组织，取出来后的组织放到取材体积20倍的多聚甲醛溶液中固定！
4 z/ P2 P* c, V" H! h) o( f1 k- e不足之处，敬请指出，相互促进！

细胞海洋

再等等吧

jianlindunev

咋没人甩我啊，可怜啊