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[请教] 请教转基因小鼠做组织化学时灌流问题 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-9-18 23:58 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
新生转基因小鼠做组织化学检测,要求要进行灌流,请问如果操作,请各位老师指导。如果从小鼠左心室-主动脉灌流,心脏组织切片中有灌流针的痕迹,非常不好看,请问有没有更好的方法。
6 Q) l4 y* @7 o9 w: u- D谢谢!
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沙发
发表于 2010-9-19 22:54 |只看该作者
咋没人甩我啊,可怜啊

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小小研究员

藤椅
发表于 2010-9-20 07:16 |只看该作者
再等等吧

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板凳
发表于 2010-9-23 18:19 |只看该作者
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小鼠麻醉后剪开胸腔暴露心脏,用20ml注射器(尖端用血管钳弄钝,避免刺破心脏或主动脉)从心尖插入至升主动脉,用血管钳固定针尖,然后用生理盐水或者pbs快速先冲洗,然后用4%多聚甲醛缓慢冲(用注射器就可以了),灌流只是临时固定以便取较脆弱的组织如脊髓和脑组织,取出来后的组织放到取材体积20倍的多聚甲醛溶液中固定!2 Q6 C7 h" B6 t9 c
不足之处,敬请指出,相互促进!
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报纸
发表于 2010-9-23 18:21 |只看该作者
要取心脏不需要灌流吧?直接取了之后再固定就可以了吧!学习一下啊!!

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地板
发表于 2010-9-23 23:02 |只看该作者
非常感谢

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金话筒 优秀会员

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发表于 2010-9-24 19:10 |只看该作者
本帖最后由 shewawa 于 2010-9-24 19:12 编辑 & D( w4 N5 f. w
+ s9 n; r- D$ a2 p
回复 4# qiongyacc 9 j! Z4 ?7 I/ r$ B0 {

. z" r8 I5 s% B  E  ~3 E是不是还需要剪开主动脉之类的吗?否则灌流液会没有出口,估计能变成气球小鼠吧。。。
8 m# G/ y# I4 c# c4 \: J) q7 i2 a1 R6 ~8 O% U
能不能顺便请教下,那个灌流的针头插入多深 才好呢,我的总会出现肺部的水肿!
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发表于 2010-10-1 22:37 |只看该作者
谢谢分享

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发表于 2010-10-2 09:53 |只看该作者
本帖最后由 瑟瑟狼 于 2010-10-2 09:59 编辑 % H' r2 d$ N4 I: {* m9 I* K  X

7 T) X" S4 X! `: a* q# O- b/ u这个叫灌注固定,也就是在动物活体时将4%多聚甲醛固定液灌流到全身。。。2 k$ A% J4 x9 R: `5 Y
3 B5 B! ]3 A2 I
灌流针从左心间插入,一般深度到达左动脉弓为宜,此时隐约能明显看到针尖在动脉弓的位置,为了方便固定,可以用小号止血钳夹住进针位置,打开灌流器(蠕动泵之类),调节流速(这个值一般靠经验),开始灌注  M& l* \/ G0 S8 c, h7 P; S: M  J
( A. x, p/ Y/ e
待小鼠快变成很“气球小鼠”之前,其实很快,也就打开灌流器之后三十秒不到,可以观察灌流器工作阻力明显增加,剪刀剪开右心包,让灌流液流出6 F. k$ i3 f+ `  _: V: O
& y9 S. N% h7 U) m7 {$ A2 K  z
期间会观察到的现像,四肢抽搐,鼠尾先翘起后僵直,肝脏颜色变浅,鼠口鼻中有白色泡沫涌出,肠道颜色稍有变化,但不是很明显,要仔细观察* l2 K( f, R  s' \# ^  l9 f% ]

8 Q: Z" |: P0 u0 d& [1 b判断灌注效果好不好的标志是
& m8 q) s, V; h6 V鼠尾僵直;肝脏变成浅色,有的人直接描述为发白; F; D/ B$ l3 u) H! D( B1 ?
* l8 `( i. O* M9 X
决定灌注质量的额外因素: S/ A- M+ R( |3 i2 n9 c* u
小鼠麻醉剂量要合适,不能让它麻醉过量;剪开胸腔前做好关注准备,剪开之后立即操作
3 v. u  |$ [$ k( V中心原则:一定要在灌流液进入之前,保证老鼠存活,血液循环畅通! j! L) T' Z1 ~2 v3 W) o

) j& x4 v% ?. ~  v我很水,希望各位牛人批评指正
4 i2 A! d, r) _4 z1 T, L
, D4 g. e+ e% m: R如果要保留完好心脏,则可以绕过左心尖,直接从主动脉弓进针,可以直接将主动脉弓截断,伤口进针,下口止血钳封闭,灌注差不多时,就不用剪开右心包,直接打开下口
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发表于 2010-10-2 12:35 |只看该作者
呃。。。差点忘了。。。是要PBS先冲洗血管。。。
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