请教转基因小鼠做组织化学时灌流问题

jianlindunev

新生转基因小鼠做组织化学检测，要求要进行灌流，请问如果操作，请各位老师指导。如果从小鼠左心室-主动脉灌流，心脏组织切片中有灌流针的痕迹，非常不好看，请问有没有更好的方法。
" Z* P" Y4 W: l' R& u谢谢！

jianlindunev

咋没人甩我啊，可怜啊

细胞海洋

再等等吧

qiongyacc

小鼠麻醉后剪开胸腔暴露心脏，用20ml注射器（尖端用血管钳弄钝，避免刺破心脏或主动脉）从心尖插入至升主动脉，用血管钳固定针尖，然后用生理盐水或者pbs快速先冲洗，然后用4%多聚甲醛缓慢冲（用注射器就可以了），灌流只是临时固定以便取较脆弱的组织如脊髓和脑组织，取出来后的组织放到取材体积20倍的多聚甲醛溶液中固定！* [' @9 o( i9 Z4 A: a: y! A
不足之处，敬请指出，相互促进！

qiongyacc

要取心脏不需要灌流吧？直接取了之后再固定就可以了吧！学习一下啊！！

jianlindunev

非常感谢

shewawa

4 I; E4 }! u: j8 n6 M
- V& p: j6 H# w! |8 {# O5 v回复 4# qiongyacc
  _8 A9 k* c5 J6 l& F1 M# S+ w2 I( H" d( a6 Z
是不是还需要剪开主动脉之类的吗？否则灌流液会没有出口，估计能变成气球小鼠吧。。。, S/ r) {% u1 c1 t% S! l- U
2 w# N2 t: ~( F8 e" \
能不能顺便请教下，那个灌流的针头插入多深 才好呢，我的总会出现肺部的水肿！

绿雪

谢谢分享

瑟瑟狼

9 J9 u3 L1 Y6 U" @; c; J; [8 Y" S" Q9 ?

  ]  I1 u/ t' p8 W1 G; S这个叫灌注固定，也就是在动物活体时将4%多聚甲醛固定液灌流到全身。。。4 w  [0 Y$ m/ ^' s
& {: g' V, @9 Q& z% ?1 x
灌流针从左心间插入，一般深度到达左动脉弓为宜，此时隐约能明显看到针尖在动脉弓的位置，为了方便固定，可以用小号止血钳夹住进针位置，打开灌流器（蠕动泵之类），调节流速（这个值一般靠经验），开始灌注
& s% o+ z! N9 I$ b2 t
- `" T6 a+ m0 Q" c6 i' d待小鼠快变成很“气球小鼠”之前，其实很快，也就打开灌流器之后三十秒不到，可以观察灌流器工作阻力明显增加，剪刀剪开右心包，让灌流液流出
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0 s6 f" N4 k' L+ R& b% B期间会观察到的现像，四肢抽搐，鼠尾先翘起后僵直，肝脏颜色变浅，鼠口鼻中有白色泡沫涌出，肠道颜色稍有变化，但不是很明显，要仔细观察
2 J8 Q: M6 m, w$ c8 C. v4 @7 P8 G8 w8 K( b2 |
判断灌注效果好不好的标志是
; r' z. A0 K' f4 g鼠尾僵直；肝脏变成浅色，有的人直接描述为发白1 C$ e/ ?8 o  R

. F: C+ ]( V) |0 e# f决定灌注质量的额外因素
' N+ a% i. q; Q8 `  D5 w- y) S小鼠麻醉剂量要合适，不能让它麻醉过量；剪开胸腔前做好关注准备，剪开之后立即操作
0 q* _4 E+ i% t# m中心原则：一定要在灌流液进入之前，保证老鼠存活，血液循环畅通
7 l: k8 a6 [$ P7 s: o
5 Q/ {- v/ u# [; f9 l  N我很水，希望各位牛人批评指正  _! R; c3 o8 i+ y+ \8 b/ z! Y6 F

9 R9 n, v4 E, e3 b3 z- \如果要保留完好心脏，则可以绕过左心尖，直接从主动脉弓进针，可以直接将主动脉弓截断，伤口进针，下口止血钳封闭，灌注差不多时，就不用剪开右心包，直接打开下口

瑟瑟狼

呃。。。差点忘了。。。是要PBS先冲洗血管。。。