今天传了两瓶原代的人骨髓间充质，消化速度那叫一个快啊！

zhanglei1414

今天传了两瓶，用0.25的胰酶，* L. \: Y$ \- k3 B/ ~" [) \( I2 w
0 K, d2 C/ N1 Y5 r, H, a
一瓶加1毫升胰酶
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加进去胰酶后赶快从超净台拿到显微镜下看，此时细胞就已经哗哗的全掉了，也就是30秒的时间，速度真的是太快了，比我原来养的上皮细胞好消化多了
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+ U" x) Z' r+ J# e) S( u8 `我以为还得用吸管吹几下呢，这下连吸管也省了
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7 D9 o+ H- {. \- o, g直接加培养基终止，然后拿瓶子使劲把壁上的细胞都晃掉  L1 ?- V  S. F+ G* L

* b% T! g7 S9 B/ A然后用枪头吸出来加到新瓶里就OK了
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30分钟后就已经有细胞贴壁了+ l6 C2 j9 ~6 R. [, I. f, {

* g! v9 }% Q1 L  {  F2 S本来想玩一下差速贴壁，上次就是看见论坛里有个家伙说用差速贴壁，纯度能达到99%，我也跟着玩了一下，结果全挂了
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这次不玩差速了，看看第一代能长起来不能吧。

chuanbaozang

消化是够快的，以前做上皮的时候消化得等近10分钟，还是放在培养箱里# }6 z3 S0 Q& b7 g5 s  N% \3 V8 D
现在消化虽然有点慢，不过三五分钟，还可以
& X2 W' p$ q5 m/ q& z2 o- z6 ^, {你消化那么快感觉不错，可能细胞活性很好。是不是也有细胞密度不是很大的原因啊？- {" _' D, ]4 E/ l/ W: n- q3 `
差速贴壁应该是用在原代上，可以让不同种类细胞按其不同的贴壁时间来分离的一种方法。你传代了，还玩什么差速贴壁啊？

putongyingwu

我也觉得消化没一楼说的那么神速，还是要等个1-2分钟吧。我也做的是人的，活性很好，密度比较大

illidancui

消化从未超过1min的飘过，做的大鼠bmsc的。
5 w7 c, a2 X* Z4 x) T速度这么快到底是好还是不好呢？

guosapphire

人的MSC还是比较柔弱的，建议使用低浓度的胰酶，我使用0.05%的胰酶消化3分钟。

manybit

有关这个人的情况吗？如年龄等

zhanglei1414

哎，可惜了我长了一瓶的细胞了，可能胰酶浓度大了，今天看了一下，贴壁的不多，死了很多啊, u/ |; G& h6 A# y" a% T& {; `
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消化太快了反而不好了，等下一瓶长好了用浓度小的胰酶试试吧- o5 c" }3 w8 d$ f+ a: j( X2 ]  B+ c
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原来做的就是消化太快了，接种后贴壁的很少了，基本全挂了
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5 ?) t8 j  M2 ^8 S# O8 f看来胰酶浓度太大了不是什么好事% |7 ]$ i4 w% m
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准备换个胰酶，稀释后再试试

小熊不杀生

我的没有那么快过，尤其是在原代培养的时候，我养的是兔BMSC，如果怕胰酶损伤的话，建议用细胞刮试试，或者稀释胰酶，延长作用时间，都能减少损伤

张俊克

胰酶的浓度估计太高了，这样对细胞的损伤比较大，建议调低浓度，时间稍微再长点会比较好。

267318024

好像有个养兔干细胞的，能不能传授点经验啊，我的兔BMSCs不贴壁，不知道为什么?