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请教iPS诱导过程中的问题(有图)   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-9-30 14:32 |显示全部帖子
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我觉得问题基本可以圈定以下几个:; v! ^; ?! @& E( a
1. 你的293或者MEF有支原体污染,feeder变差就是这个原因,支原体存在基本上是做不出iPS的,必须除去(这个应该是主要原因,其他两个是附加建议)
0 |2 L0 o1 f* P2. 你用的MEF代数太老了,一般三代以内,P2更好。/ M! t) ^: |% l; }0 _
3. PMX诱导,你附加了什么包装质粒,如果滴度高,六天四因子感染的MEF会长得满盘都是,所以包装质粒,转染技术可能都要提升。
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沙发
发表于 2010-10-1 22:27 |显示全部帖子
支原体极有可能在你的293T细胞上,这样你的病毒就带支原体
; y6 M; \5 @, `带了Myc的细胞自然长势良好,只是你这个也不能算长势良好,只是能活能分裂罢了,要不然六天必然密到堆起来。如果有支原体是没有办法的,必须换细胞。不要幻想能除去支原体。
7 I* ?; k" {* m" l8 h人的细胞代数大点没问题的,十代左右也就中等效率吧。MEF P4基本不行了。6 ?. G" \$ o1 q1 d" X- X2 X9 u- o
你ES培养基是用FBS吧,没有用KSR吧?一般来说就是用15%的FBS养。7 G4 K1 }9 ?1 B

% b* `. @2 J( s/ A8 b  K9 l% z: a建议去找株干净的platE细胞,实在不行找一株干净的293,估计问题就能解决了。
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