Fibronectin包被后为什么要用BSA(牛血清白蛋白)封闭呢

chinajinlei

请教，在用Fibronectin(简称FN)包被培养板等基材培养细胞的时候，一些文献上说FN包被之后要用BSA(牛血清白蛋白)进行封闭，然后再种植细胞。4 \8 B% l9 Y+ \/ |( b) s8 v
(1)请问大家在FN包被时候都用BSA封闭了么？7 {7 H+ Z  |& o
(2)为什么要用BSA封闭，封闭后会不会对FN表面的细胞结合域产生影响进而影响细胞的粘附呢？
9 e8 ~& c8 o, ^# z: D( s5 ]8 d, ]4 v( z, Y3 d5 w- Q3 O
例子：3 _% T" G% }+ s" Q# L5 J. W, n
“实验组以不同终浓度的FN(0, 10, 20, 40mg/L)包被96孔培养板和24孔培养板, 4℃过夜。PBS轻洗3次,加入20g/L BSA溶液, 37℃封闭2h。对照组不加FN,只以20g/L BSA溶液封闭2h。DMEM漂洗3次,超净台内备用。设实验组、对照组和空白组,空白组只加培养液,不加细胞,用于比色调零。每个浓度设4个复孔,实验重复3次。”[1]
* m" P+ }7 {! q0 T[1]刘驰 and 付荣嵘 (2009). "纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系的增殖、黏附和移行的影响." 国际眼科杂志 v.9(08): 1458-1460
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The coating procedure involved dissolving the matrix protein in phosphate buffered saline (PBS) at a concentration of 50 ug/mL and using it in 12-well culture plates (200 uL per well). Plates were left at 4°C overnight, washed with PBS, and incubated with a blocking agent (1% BSA) for 2 hours at 37°C before the onset of culture.[2]
9 Y0 F# f$ o  M7 O3 T[2]Jiang, F., Y. Z. Jia, et al. (2002). "Fibronectin- and protein kinase C-mediated activation of ERK/MAPK are essential for proplateletlike formation." Blood 99(10): 3579-3584

supergama

# Y$ k1 \2 @5 d, p! l' `3 m" _- @- {6 z9 x) _& \% M4 P
第一，Fibronectin封闭的问题0 O+ L& N* s! Q; P
1、fibronectin蛋白除了结合细胞（通常是integrin）的位点外还有其他活性位点（如collagen，syndecans等），这些位点可能会影响细胞的培养属性，需要BSA封闭。
; v2 m3 n" O! ?4 P* N7 H2、fibronectin常用来源是血浆，所以难免混有趋化因子等分子，这些也可能影响到细胞的培养属性，所以需要封闭。
! L% f) D/ S$ W0 ^第二，我们通常培养细胞的培养液加有血清，所以一般不再额外添加BSA对包被的fibronectin进行封闭。5 V" d3 [, p) o0 G/ `
第三，在有些实验，如趋化实验时，因为培养体系中不加血清，这时可以添加BSA进行封闭。

chinajinlei

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