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hUCMSCs酶消化法中的一些问题!   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-10-13 19:44 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位前辈,我想请问一下在脐带组织在经过胶原酶2消化之后,液体很粘稠,有文献说加PBS稀释,然后用100目过滤,然后离心。我做了之后遇到了些问题:
6 q4 I8 [4 K! L) o1.3-5倍的PBS稀释后液体仍较粘稠,过滤很困难,也许是方法不对,望各位指教!. K. }' k6 f3 L
2.由于液体呈胶体状,离心之后无沉淀,是转速的问题吗??
% J9 i+ O& W5 P. y6 e求解!!!!
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沙发
发表于 2010-10-13 20:22 |只看该作者
DNA释放出来了,可以考虑加入一定量的DNase。
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藤椅
发表于 2010-10-13 20:24 |只看该作者
学习了

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板凳
发表于 2010-10-14 08:40 |只看该作者
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加DNAse或多洗几遍
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报纸
发表于 2010-10-14 09:09 |只看该作者
消化时间不够吧
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地板
发表于 2010-10-14 22:55 |只看该作者
是的,我也做过脐带MSC,你再加入透明质酸一起消化后,就不会稠了,也好离心了。
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发表于 2010-10-18 16:32 |只看该作者
回复 2# supergama
2 \+ e4 n' W! F! [2 @& x/ c7 ?, e! r
: o0 g7 ^4 H9 H. L
    请问是在消化完成之后加DNase吗?加入的计量还有时间如何让控制呢?

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发表于 2010-10-18 16:34 |只看该作者
回复 5# cl5823283
- j' y7 h$ _7 u5 \
; O! X! O: a4 v) m6 d1 I
1 R, G6 H( t) M4 V    我用胶原酶2消化过夜,又用加入胰酶消化了40分钟!4 I. D1 P( n+ W; g+ r/ N" e. \
   请教高人指点!

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发表于 2010-10-18 16:35 |只看该作者
回复 6# xiaona918 , F, i! `8 |& [. H3 O. v% Q9 k  c
7 R' y' N5 Y7 x! J/ S

0 f' K1 y1 `, d* Y3 b% a    谢谢!请问你加入的时机、计量、时间分别是多少呢?

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发表于 2010-10-18 20:14 |只看该作者
回复 7# hospitalshy ; R; n% T: c+ g2 e0 g
终止消化后加入1ml含10mg/L的DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液(pH7.4)消化1min,离心去上清收集细胞,再次加入1ml含10mg/L DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液(pH7.4)小心吹打。静置5min,离心收集细胞。
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