hUCMSCs酶消化法中的一些问题！

hospitalshy

各位前辈，我想请问一下在脐带组织在经过胶原酶2消化之后，液体很粘稠，有文献说加PBS稀释，然后用100目过滤，然后离心。我做了之后遇到了些问题：
; }6 Z) ]- a1 c0 j- _1.3-5倍的PBS稀释后液体仍较粘稠，过滤很困难，也许是方法不对，望各位指教！# D! E$ P; O( `3 L2 }
2.由于液体呈胶体状，离心之后无沉淀，是转速的问题吗？？4 e: m- `- c9 B# j" K! _9 g
求解！！！！

supergama

DNA释放出来了，可以考虑加入一定量的DNase。

qianqianlaile

学习了

hawkyiger

加DNAse或多洗几遍

cl5823283

消化时间不够吧

xiaona918

是的，我也做过脐带MSC，你再加入透明质酸一起消化后，就不会稠了，也好离心了。

hospitalshy

回复 2# supergama
# r. x+ m# l# X% u5 M9 ^( X0 `# H
2 k4 I' ]+ @2 M! T( H
; P- F5 x) ~- n7 B. g7 P) x6 ]* g    请问是在消化完成之后加DNase吗？加入的计量还有时间如何让控制呢？

hospitalshy

回复 5# cl5823283
# q* D7 S' H% c7 J  u
  K6 t4 F& S4 e! p5 a( G  E
6 Z+ U) t3 g& C0 i7 b( @    我用胶原酶2消化过夜，又用加入胰酶消化了40分钟！
4 I1 Q  t% {- g( S8 |( {   请教高人指点！

hospitalshy

回复 6# xiaona918 % p: L' l+ q7 U' b" v

8 ^6 ]1 y( n( [6 z$ v9 {$ G" H+ u2 I$ ^: t  w8 }
    谢谢！请问你加入的时机、计量、时间分别是多少呢？

supergama

回复 7# hospitalshy ( \: [3 G% _( B4 Z. r, u6 @
终止消化后加入1ml含10mg/L的DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液（pH7.4）消化1min，离心去上清收集细胞，再次加入1ml含10mg/L DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液（pH7.4）小心吹打。静置5min，离心收集细胞。