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hUCMSCs酶消化法中的一些问题!   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-10-13 19:44 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位前辈,我想请问一下在脐带组织在经过胶原酶2消化之后,液体很粘稠,有文献说加PBS稀释,然后用100目过滤,然后离心。我做了之后遇到了些问题:
; }6 Z) ]- a1 c0 j- _1.3-5倍的PBS稀释后液体仍较粘稠,过滤很困难,也许是方法不对,望各位指教!# D! E$ P; O( `3 L2 }
2.由于液体呈胶体状,离心之后无沉淀,是转速的问题吗??4 e: m- `- c9 B# j" K! _9 g
求解!!!!
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沙发
发表于 2010-10-13 20:22 |只看该作者
DNA释放出来了,可以考虑加入一定量的DNase。
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藤椅
发表于 2010-10-13 20:24 |只看该作者
学习了

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板凳
发表于 2010-10-14 08:40 |只看该作者
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加DNAse或多洗几遍
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报纸
发表于 2010-10-14 09:09 |只看该作者
消化时间不够吧
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地板
发表于 2010-10-14 22:55 |只看该作者
是的,我也做过脐带MSC,你再加入透明质酸一起消化后,就不会稠了,也好离心了。
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发表于 2010-10-18 16:32 |只看该作者
回复 2# supergama
# r. x+ m# l# X% u5 M9 ^( X0 `# H
2 k4 I' ]+ @2 M! T( H
; P- F5 x) ~- n7 B. g7 P) x6 ]* g    请问是在消化完成之后加DNase吗?加入的计量还有时间如何让控制呢?

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发表于 2010-10-18 16:34 |只看该作者
回复 5# cl5823283
# q* D7 S' H% c7 J  u
  K6 t4 F& S4 e! p5 a( G  E
6 Z+ U) t3 g& C0 i7 b( @    我用胶原酶2消化过夜,又用加入胰酶消化了40分钟!
4 I1 Q  t% {- g( S8 |( {   请教高人指点!

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发表于 2010-10-18 16:35 |只看该作者
回复 6# xiaona918 % p: L' l+ q7 U' b" v

8 ^6 ]1 y( n( [6 z$ v9 {$ G" H+ u2 I$ ^: t  w8 }
    谢谢!请问你加入的时机、计量、时间分别是多少呢?

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发表于 2010-10-18 20:14 |只看该作者
回复 7# hospitalshy ( \: [3 G% _( B4 Z. r, u6 @
终止消化后加入1ml含10mg/L的DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液(pH7.4)消化1min,离心去上清收集细胞,再次加入1ml含10mg/L DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液(pH7.4)小心吹打。静置5min,离心收集细胞。
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