hUCMSCs酶消化法中的一些问题！

hospitalshy

各位前辈，我想请问一下在脐带组织在经过胶原酶2消化之后，液体很粘稠，有文献说加PBS稀释，然后用100目过滤，然后离心。我做了之后遇到了些问题：
6 q4 I8 [4 K! L) o1.3-5倍的PBS稀释后液体仍较粘稠，过滤很困难，也许是方法不对，望各位指教！. K. }' k6 f3 L
2.由于液体呈胶体状，离心之后无沉淀，是转速的问题吗？？
% J9 i+ O& W5 P. y6 e求解！！！！

supergama

DNA释放出来了，可以考虑加入一定量的DNase。

qianqianlaile

学习了

hawkyiger

加DNAse或多洗几遍

cl5823283

消化时间不够吧

xiaona918

是的，我也做过脐带MSC，你再加入透明质酸一起消化后，就不会稠了，也好离心了。

hospitalshy

回复 2# supergama
2 \+ e4 n' W! F! [2 @& x/ c7 ?, e! r
: o0 g7 ^4 H9 H. L
    请问是在消化完成之后加DNase吗？加入的计量还有时间如何让控制呢？

hospitalshy

回复 5# cl5823283
- j' y7 h$ _7 u5 \
; O! X! O: a4 v) m6 d1 I
1 R, G6 H( t) M4 V    我用胶原酶2消化过夜，又用加入胰酶消化了40分钟！4 I. D1 P( n+ W; g+ r/ N" e. \
   请教高人指点！

hospitalshy

回复 6# xiaona918 , F, i! `8 |& [. H3 O. v% Q9 k  c
7 R' y' N5 Y7 x! J/ S

0 f' K1 y1 `, d* Y3 b% a    谢谢！请问你加入的时机、计量、时间分别是多少呢？

supergama

回复 7# hospitalshy ; R; n% T: c+ g2 e0 g
终止消化后加入1ml含10mg/L的DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液（pH7.4）消化1min，离心去上清收集细胞，再次加入1ml含10mg/L DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液（pH7.4）小心吹打。静置5min，离心收集细胞。