hUCMSCs酶消化法中的一些问题！

hospitalshy

各位前辈，我想请问一下在脐带组织在经过胶原酶2消化之后，液体很粘稠，有文献说加PBS稀释，然后用100目过滤，然后离心。我做了之后遇到了些问题：
* P5 B0 C* L, J2 ~! f: `1.3-5倍的PBS稀释后液体仍较粘稠，过滤很困难，也许是方法不对，望各位指教！( X$ M/ X. t% t  ?: u
2.由于液体呈胶体状，离心之后无沉淀，是转速的问题吗？？
# m2 B' x2 I! W# V) N$ d求解！！！！

supergama

DNA释放出来了，可以考虑加入一定量的DNase。

qianqianlaile

学习了

hawkyiger

加DNAse或多洗几遍

cl5823283

消化时间不够吧

xiaona918

是的，我也做过脐带MSC，你再加入透明质酸一起消化后，就不会稠了，也好离心了。

hospitalshy

回复 2# supergama " E3 z% Z6 e; c9 B

' [8 L# s& C# s9 A3 S5 Z$ S* n3 g5 g4 p+ w1 `3 P3 ]  e* |+ }6 `
    请问是在消化完成之后加DNase吗？加入的计量还有时间如何让控制呢？

hospitalshy

回复 5# cl5823283 2 X* v! o6 f( q4 A5 m

' w. Q# [+ U6 h- }" v! h" F; d; O% s# a7 r) a9 |
    我用胶原酶2消化过夜，又用加入胰酶消化了40分钟！
/ I7 k0 k* U8 J3 W   请教高人指点！

hospitalshy

回复 6# xiaona918 1 a/ `$ g: ^) Z' V" n
! z2 c: }4 d8 N9 p4 \0 w) @+ A

3 J  K5 E# E. o& D) M    谢谢！请问你加入的时机、计量、时间分别是多少呢？

supergama

回复 7# hospitalshy
3 X2 z, y+ d- h4 E终止消化后加入1ml含10mg/L的DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液（pH7.4）消化1min，离心去上清收集细胞，再次加入1ml含10mg/L DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液（pH7.4）小心吹打。静置5min，离心收集细胞。