hUCMSCs酶消化法中的一些问题！

hospitalshy

各位前辈，我想请问一下在脐带组织在经过胶原酶2消化之后，液体很粘稠，有文献说加PBS稀释，然后用100目过滤，然后离心。我做了之后遇到了些问题：+ U& n: n; u+ w
1.3-5倍的PBS稀释后液体仍较粘稠，过滤很困难，也许是方法不对，望各位指教！
0 ]3 |' E+ Q* N2.由于液体呈胶体状，离心之后无沉淀，是转速的问题吗？？
! M6 ~5 @/ N3 k6 h% t1 }) G求解！！！！

supergama

DNA释放出来了，可以考虑加入一定量的DNase。

qianqianlaile

学习了

hawkyiger

加DNAse或多洗几遍

cl5823283

消化时间不够吧

xiaona918

是的，我也做过脐带MSC，你再加入透明质酸一起消化后，就不会稠了，也好离心了。

hospitalshy

回复 2# supergama
4 E+ x( e. q4 y3 v  [9 t& Q3 e& {
9 U  [5 k' K% d: e+ q- }/ Q7 u, o  W. |- K; ?0 |4 _
    请问是在消化完成之后加DNase吗？加入的计量还有时间如何让控制呢？

hospitalshy

回复 5# cl5823283
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! ~7 ?- i# b" ]8 W0 ^- ]9 Y. b& d& G, H* l, P4 U; C
    我用胶原酶2消化过夜，又用加入胰酶消化了40分钟！
# R2 ~( X; A$ _/ g# z9 S   请教高人指点！

hospitalshy

回复 6# xiaona918
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+ [7 K' L: Q! g. x( P9 K" X/ M: s; |) w) J+ u6 J: B2 J, c
    谢谢！请问你加入的时机、计量、时间分别是多少呢？

supergama

回复 7# hospitalshy
7 s  A4 h; J7 }2 A+ o. g终止消化后加入1ml含10mg/L的DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液（pH7.4）消化1min，离心去上清收集细胞，再次加入1ml含10mg/L DNase Ⅰ(Sigma)的D-Hank液（pH7.4）小心吹打。静置5min，离心收集细胞。