脐带的分离遇到难题

清影

脐带用胰酶消化后过筛很粘稠，什么原因？怎么处理啊？单纯稀释可以么？有没有更好的办法？

zhenhuale

同意楼上的，对于UC-MSC组织块贴壁法要比酶消化法更加经济也效果更好。

清影

请问楼上你们是离心洗涤么？转速多少？上清倒掉时会损失很多细胞

chuanbaozang

我们的培养过程中试验了组织块贴壁和酶消化方法, x& H6 ?- F" ]8 o
组织块剪碎后，直接贴壁，2小时后补加培养基，迁出的细胞数量少，但后期活性比较好。( H! |. z/ Y8 E1 i, F; f
酶消化后很粘稠，没法过滤，所以我们经过洗涤后直接加培养基进行培养，虽然会有大量漂浮物，可3天左右会有很多贴壁细胞，经过换液后视野也会很澄明，可以试一下哦

清影VS猪猪

请问“静水流深”，胰酶浓度多少？消化时间？我们经验，胶原酶消化后，若胰酶消化过度（>30min),细胞活力下降

静水流深

胰酶消化时间要充足 滤网需要用两个 一大一小 其实我们用原位组织块分离脐带多一点

stylelife

如果样品很少，撕下华通胶就更少了，我的方法是一起处理，先用胶原酶4度消化过夜，再用胰酶消化，这样过滤的时候就不怎么粘稠了哈！

清影

,谢谢楼上的同胞们。' ?/ J# W* w- j  {; x, `7 t
目前我们已经找到了一些解决途径，使用DAase,HAase,DTT等，效果还不错。单纯的增加稀释，对细胞损失确实很大。

雾里看花250

我就是反复洗然后离心，多洗几遍，但有一个缺点就是会损失一些细胞。

jhu132llh

回复 3# 清影 7 a, }9 b5 H3 X6 {! B: `9 w

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/ f7 i1 m1 A* N' S1 q  o) R    酶消化时间和筛子都差不多了，我们还用200目的那
, T. ^* N& O$ N8 c   我们实验室的经验在酶消化中间是要每隔20分钟要用枪吹打几次的，你可以参考一下；& T: G+ c, a  A+ n
   过筛前腰充分的吹打稀释的，你可以适当的增加吹打次数和稀释倍数吧。
4 I- I9 m; k" N* S5 h+ k! C% \! V   这是我们实验室的经验，希望对你有用。