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过碘酸一雪夫反应 Y B( D( X; U) W& K
periodic acid Schiff reaction ,PAS2 w3 A- I0 V) [, F I5 ?) U
+ f1 C0 y6 o# Y, v* @; B0 P原理:# B) _$ `4 R/ U t7 o
2 Z" W2 z' s" l" p 血细胞内含乙二醇的糖类物质(PAS)能被过碘酸氧化,形成双醛基类物质。后者与无色品红结合,形成紫红色沉淀物,沉淀物的显色深浅与乙二醇的含量成正比。
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" y* S. M$ @; D# ?5 s正常细胞反应 :
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1. 粒细胞系-----原粒细胞多呈阴性, 通常随细胞不断成熟阳性反应由弱渐强, 至细胞完全成熟后达到最大强度。其中,中性粒细胞呈胞质内弥散状红色阳性,嗜酸粒细胞S颗粒之间的胞质呈红色阳性,嗜碱粒细胞呈大小不一的颗粒状紫红色阳性。
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, N" \, u" ?; {2. 单核细胞系---各阶段部分单核细胞可呈弥散伴细小颗粒状红色阳性。定位于胞质内。
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3. 淋巴细胞系---由于亚群的关系, 可有所不同,T-细胞仅一小部分可呈粗颗粒和小快状阳性,但B-细胞绝大部分呈阳性反应。
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( M+ m' O" s" e' Y5 Y4 N- Z4. 红细胞系----红细胞系的各个阶段皆呈阴性反应,偶见少数幼红细胞有较弱的阳性反应。
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& {+ O0 D$ ~3 a+ l G, v# S% T5. 巨核细胞系-- 巨核细胞和血小板呈弥散性和粗大颗粒状强阳性反应,且随细胞成熟而增强。定位于胞质内。6 r) \" Y; }2 ~
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6. 其他----浆细胞呈阴性反应, 偶见少数呈较弱阳性。巨噬细胞可呈阳性反应。均定位于胞质内。
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2 U4 @8 c( _* g& m. U8 n: ]9 w+ y临床评价:
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1. 能被过碘酸一雪夫反应呈阳性的多糖类物质有糖原、粘多糖、糖蛋白、糖脂 , 还包括一些磷脂类物质等, 因此PAS阳性不能简单地就表明有糖原的存在, 只是在对血细胞的组织化学研究中通常习惯于将PAS阳性认同于糖原。/ Z6 \3 n7 C8 T: Z
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2.PAS染色虽然不完全代表糖原,但在血液系统疾病特别在各类型白血病中却有较大的应用价值。
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( R; O9 `0 z$ v4 `(1) 粒细胞系统: 糖原是保障中性粒细胞吞噬功能的能量来源,所以在急性炎症时PAS染色阳性程度明显增强, 在淋巴系统恶性增生性疾病、真性红细胞增多症、类白血病反应等时亦可增强, 在粒细胞系统恶性增生性疾病如急粒、慢粒等, 其阳性程度可减低。
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(2) 红细胞系统 AS染色在红细胞疾病中具有较大的使用价值,在大部分红血病、红白血病及部分重型海洋贫血等疾病中可呈强阳性反应, 部分缺铁性贫血、重型海洋贫血、MDS、骨髓硬化症等可见阳性反应。其它类型的贫血如巨幼红细胞性贫血、再生障碍性贫血、溶血性贫血等均为阴性反应。
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, x6 L9 `% l8 e& s- G" K3 {4 ~" B* u(3) 巨核细胞和血小板系统: 巨核细胞胞浆中存有糖原和粘多糖两类物质,糖原呈粗大紫红色颗粒或块状,粘多糖呈弥散状红色细颗粒, 二者遍布于整个胞浆之中。此为一般血液细胞所不具有,利用此特点有助于与恶性细胞相鉴别, 并结合电镜PPO染色, 免疫表型检测以确定原始巨核细胞的存在和对M7的诊断。. ~' W* e+ n! `( e/ r6 u
# J" }; |1 \' H) {+ {& L' f(4) 淋巴细胞系统: 淋巴细胞糖原的改变主要体现在不同类型的淋巴细胞克隆性增生疾病之, 其中尤以B-细胞恶性增多改变较为明显,如慢淋、淋巴肉瘤、急性B-细胞白血病等疾病的PAS阳性率和阳性强度可明显提高。而T-细胞恶性病变PAS强度无明显改变,另外,淋巴细胞由于感染引起的增多通常PAS多在正常范围之内。
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7 ~) h2 ~! [7 P% I/ w' L6 n3.PAS 染色虽不能特异地表示何种病理改变,但结合其它细胞化学染色和细胞免疫表型检测及超微结构检查等,对部分疾病的诊断和鉴别诊断具一定价值, 如MDS、M6与其它类型贫血的鉴别;原淋细胞与原单核细胞、原粒细胞的鉴别 ;M6与M7的鉴别、高-雪细胞与尼曼达克细胞的鉴别、 (Reed-Sternberg) 瑞-斯细胞和巨核细胞的鉴别、骨髓转移性腺癌细胞与白血病细胞的鉴别。* o. E7 m2 I) k
. N2 K" P% l' ^% {+ G2 t操作步骤:" ]* v* I0 h' P7 x1 Z' T1 l) Z3 Z
9 l: C3 _5 y1 |+ e' l. M' g, r8 v 涂片滴加固定液5~8滴,盖满血膜即可,5分钟,水洗待干。滴加PASⅠ液10分钟(若实验室温度较低可适当延长5~10分钟),水洗待干。置入PASⅡ液内室温(20~25℃左右为宜)暗处放置30分钟,然后小心取出涂片流水冲洗数分钟。苏木素复染l~2分钟,水洗待干,镜检。( X1 Z& G& n4 A" T+ c3 Z
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结果显示:$ V6 F5 c; o% A9 ~- N
$ J0 L5 K- D6 j. ~- V阴性 —(–)胞质内无色。. B T, i1 A0 V/ o' e) s Z( T
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阳性 —(+)胞质内呈淡红色或有少量细小红色颗粒。
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(++)胞质呈红色或有10个以上红色颗粒。. B; l Y1 T" h; G( t6 l$ Y
1 g, v/ A N# V; d( ?(+++) 胞质呈暗红色或有粗大红色颗粒,可出现红色块状。
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(++++) 胞质呈紫红色或有粗大红色块状。8 [2 _9 ~$ v5 I7 ?* L* r5 |
6 |# j5 X5 z: q注意事项:4 f, a1 R: L2 o, v* R2 y
0 H9 l# q; A) u1 G6 F1.标本除新鲜涂片外, 保存较好未被污染的涂片也可使用。
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2.标本和器材应避免被还原基团的物质所污染, 以免出现假阳性。2 m/ P8 B3 e! B. B; l/ G% L) R
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3. 涂片经PASⅠ液氧化水洗后, 必须待涂片彻底干燥后方可置入PASⅡ液中, 以免细胞间隙中的残留水份导致整张涂片呈鲜红色, 影响结果观察。# ~+ V# |4 K8 b# \; }/ D
- _2 a& V4 Q1 v% ]' c* g0 r4 e4. 每次操作均须取正常标本做阴、阳性同步对照。6 f% i. x8 ~4 ?: H9 e2 i
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5. 实验室操作人员最好相对稳定,可使结果稳定得以减少室内误差。0 F9 J. }) H2 z5 W' p6 }0 ~
5 n C, T2 R5 `3 k4 Q- |( y# g6. 观察结果时需注意涂片的部位,最好选择体尾交接处,有时不同部位其阳性强度可相差二个(+)以上。
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7. 染色后应及时观察结果, 或用中性树胶封片, 以利长期保存。
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, ^7 d# F9 F" _8 d/ W/ m. d. v常见问题与解决方法:
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常见问题3 K: R5 C0 a, a
原因
( z- y- {& ~1 h解决方法/ y4 x% l+ P, V( i0 P+ ?9 c
未见阳性或阳性减弱:9 @) F+ Y9 M: e" U& t4 M
试剂盒过期 从新购买试剂盒
1 P5 I" s) |% b% z v: H0 _试剂开封后未盖紧 开启新试剂盒, C: l& [, H+ n3 c
PASⅡ开封后混入杂质或水造成试剂变质返红
8 y4 [. O% e9 g( p* O r `6 d4 Z开启新试剂盒
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载玻片未洗净标本被污染 取干净玻片从新采集标本0 K" s* E0 ?2 Q$ O
采用了加有抗凝剂的标本 从新采集标本: T; l3 `3 g* l. ~8 S5 P
标本沾遇其他化学物质维生素C、 甲醛等 采用未被污染的标本重新染色
0 E% v" I ?8 W) K( o! d9 D8 s标本在Ⅰ液内氧化时间不够 另取标本和新试剂从新操作) [' V4 F) }2 i) U7 P
试剂配制后未及时使用 需取新试剂从新配制9 W! u# X( o- e) j! A3 M* d8 A
孵育时间或温度不够 调整温度或孵育时间
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染色背景太复杂:- `3 }; M+ H* D1 r7 U( e
标本在Ⅰ液内氧化水洗后未彻底干透 若影响观察需另取标本重新染色
, |' }9 j- e4 a* p' y背景细胞染色过深
- u. `# j/ w6 P6 w& G孵育时间太长,若影响观察需另取标本重新染色
% O$ X; I! \: K- y, l染色后冲洗方法不当 不要连染色缸一起置流水冲
6 @3 L/ ^( \; ?8 p复染后水洗时间不够 复染后水洗时间通常为3~5分钟而且须连复染液一起冲洗 |
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