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苏木精染色
5 z1 H2 }% t9 t) `& V【中文名称】苏木精6 c; L/ P' D0 W7 [; E- A
【英文名称】hematoxylin;h(a)ematine
# F E: U6 w' U/ C9 Y【性状】
4 e& N A, Z6 z# G( P 无色棱形晶体，遇光变红。7 K7 n- G5 H: M
【溶解情况】* @ w0 p" C ]) b/ l
难溶于冷水和乙醚，易溶于热水和热乙醇，溶于碱、氨和硼砂的溶液。$ C' }& M+ z0 o. _6 j9 |& |3 a
【用途】6 D* R! r8 _5 V0 `) h9 F% W+ s
一种天然媒介染料。用于蚕丝、毛皮和皮革的染色以及棉布的印花，用不同的媒染剂可得到蓝色或黑色。与重铬盐、铁盐、亚铁盐、铝盐和锡盐等一起可制成各种色淀。在分析化学中用于比色分析、显微镜分析，并用作pH值指示剂，变色范围5.0～6.0，由黄色变紫色。苏木精(hematine)为碱性染料,将细胞核染为蓝色;) c) f4 M, ?* C/ |, e6 h2 R
【制备或来源】2 U) b. b2 @/ T) V2 n; s
由苏木树的木材获得。8 E7 b6 j1 h2 P' k5 B1 g
【其他】. E( x, m z: \0 w7 T. r- u
含有3分子结晶水，在100～120℃溶于本身的结晶水中。在水溶液中，特别是在碱溶液中易被空气氧化成红棕色的氧化苏木精。
, W) W3 g6 z3 e 常与伊红配合，苏木精将细胞核染成蓝色，而用伊红（署红）将细胞质染成红色。" @3 t* _& ^" z9 O/ @+ ]. S) d/ H
溶液要避光保存。5 D. G( ]/ c; J8 P
1 [- y9 x% M9 A9 ?- U4 W配方：/ L! q' K+ W5 ]7 j, W5 F
苏木精的染色液有很多，如通用的苏木精染色液和各种改良后的苏木精染色液等等。0 v _7 U# v( K- ^, W6 }
一，改良的苏木精染色液一. I% c/ W( j3 B' x w1 e7 y
材料 苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝10g，蒸馏 水750ml，碘酸钠0.5g，柠檬酸1g。方法 将苏木精溶于无水乙醇，将硫酸铝溶于水，两液混合加热煮沸2min，加入碘酸钠及柠檬酸。优点 此液存放时间长，染色力保持时间长，染色效果好。
7 U1 R9 F5 y2 c) j$ ^ 用硫酸铝替代钾明矾染液久放也不会产生沉淀、结晶，不用过滤即可使用。此液存放时间长，染色力保持时间长，经过我室比较，使用时间可比哈瑞氏苏木精染液长一倍。1g苏木精配置的染液是哈瑞氏苏木精染液的两倍，更加经济实用。此液染色效果好，染色时间3～8min，特别是染色质显色清晰，但应注意一些染色技巧，配置盐酸酒精分化液时，浓度稍低，一般控制在0.8%左右，分化时间稍短，应在30s之内。氨水配制成1%，返蓝时间要较长，一般控制在1～2min，充分水洗后再进行下面的染色。; a: Z4 u5 F! s" I+ V
6 z" \' o7 X7 e1 ]# H6 P( C1 ~# n二 通用海登汉氏苏木精染色液
( G2 Y% A' {8 c2 j5 o4 {2 K, ~$ S海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。
- n: N& L4 ?2 g配方：甲液（媒染剂）： 硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml （必须保持新鲜，最好临用之前配制）。
3 U/ P9 L# ~. w9 V8 p, s, G o乙液（染色剂）：苏木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸馏水 90ml ; p( I! h0 V8 ], }7 j8 E
配制步骤：, O9 C4 `5 l0 w# u' z
（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。- ^8 Z# T# O; X; K i7 I# ?
（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。
, ~! z& I# _( y& n C% z切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。 铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。* P/ p. v4 u2 L# }) s+ }
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配方三：苏木精水溶液
0 Q4 K& q% F" l# ]" O& e0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。
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配方四：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin）
" D9 q% J7 J1 v# b! E, |: O甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml
" ]1 x7 e* y% q9 E0 I乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml 7 Z+ O2 V% V- ~! U" p
丙液：甘油25ml + 甲醇25ml
) h. g& \9 t# {! F" b# m( t分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
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配方五：爱氏苏木精（Ehrlich’s haematoxylin）
3 \4 c0 Z$ _( D5 O C苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾（钾矾）3~5g。配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。7 u4 J v0 H5 V9 P. S: Z) h6 b5 F
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2 X% W$ L, R) d5 c8 k染色方法：3 j& {! [* \8 X% ?; k5 q8 x
一 石蜡切片的苏木精-伊红染色法
/ W/ o. S" \8 O/ G2 [* ]/ Q（1）切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。
$ [# b& q+ A1 U3 }8 ~（2）移入二甲苯和纯酒精（1∶1）混合液中5分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可略）。
( s! D) M8 L x) U0 d2 I8 [( w（3）入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。最后经蒸馏水转入染液。
9 l6 v9 D) B1 p8 \# C（4）苏木精染液染色5～15分钟。、+ L" `, l# D% j$ ]
（5）水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精（70％酒精配制）分色片刻。镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。
0 G @) g1 Z& y$ s5 ]（6）流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色。（7）蒸馏水短洗。
: } a+ j7 g8 S9 L; b7 J( O6 u/ [（8）0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。
. U' Y% L/ s/ e（9）依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。
- K. S( q4 J r; _（10）二甲苯透明（二次），共约10分钟。
]) `2 r* M/ n! S0 J4 z) N, `（11）封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。% l6 g7 o# }- C4 g9 k
# S S, \( U. n0 q# ~
还有其他很多的苏木精染色的方法，主要是用于对染色体的染色，基本方法都差不多，大家实验室都有我就不啰嗦了。 |
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发表于 2010-11-17 14:03
发表于 2010-11-17 16:17
