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本帖最后由 deron 于 2010-11-23 08:27 编辑
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苏木精——主要用于细胞核染色
! [, H& o2 m8 b1 [6 H 版权很大部分来自于“中山大学医学院病理学教研室 凌启波”' P" R* M0 l0 L; K+ q9 d. X8 j( H2 A1 X
一、苏木精的性质
# k- H8 p9 x$ x6 r9 V9 R苏木精，又称苏木素，苏木色精（Hematoxylin）,C16H4O6，分子量302.288。无色或淡灰黄色粉末，市售有无水和含3H2O两种；易溶于乙醇、乙二醇和甘油，微溶于水；本身不是一种染料，没有染色性能，经过氧化和媒染后，才成为一种很好的细胞核染料。' B1 v4 G% V( k; `# z
苏木精不是一种活性物质，从分子结构上，苏木精没有发色团，所以没有染色能力。但其溶液放置后，由于氧化作用形成苏木红（hematein），才成为一种染料。: p9 p, _+ E& ]; `
醌型苯环是一个发色团，这样，在苏木红的分子结构中，原有助色团羟基 ，又有了发色团醌型苯环。; @' q8 [. L' h' |* ^/ O
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二、苏木精的氧化
2 V7 Q" @' U5 y, w8 A/ W; j: ~& ]苏木精的氧化有两种方式：0 v/ R9 f- k, @$ M. T
1.自然氧化：通过空气和阳光的作用而被自然氧化成苏木红，过程数周至数月。这种染液的保存和使用寿命较长。1 S+ ~7 U- \, w3 _+ l# {
2. 人工氧化：配制染液时加入一定量的氧化剂如氧化汞、碘酸钠、高锰酸钾或过氧化氢等可立即使苏木精氧化成苏木红。但要注意加入氧化剂过量时会造成氧化过度，破坏了苏木红的分子结构，导致苏木精液的染色力减弱甚至失效。 & e: J3 l z3 {% z" a$ r
成熟的苏木精染液是苏木精、苏木红、苏木红的活性氧化产物和非活性的超氧化产物的混合物。
3 D5 F0 Y+ x. S3 A( K4 y9 x8 `早期传统用氧化1g苏木精所需氧化剂的量是：氧化汞 500mg 、碘酸钠 200mg 、高锰酸钾 177mg 、过氧化氢 2ml，但问题是染液使用寿命不长。$ f1 {0 I3 I0 x6 t! Q1 v! h/ ^# ?4 H4 i) l
近年有学者提出用较少量的氧化剂来配制苏木精染液，其染色效果亦佳，苏木精染液的使用寿命延长。他们推荐1g 苏木精所需氧化剂的量是：氧化汞 100mg、碘酸钠 40~100mg、高锰酸钾 90mg 、高碘酸钠35mg、碘 200mg 、高碘酸钾 50mg
, E y) O( m8 d- f理论上，1g苏木精•3H2O完全氧化成苏木红需用碘酸钠185mg，而1g无水苏木精完全氧化则需用碘酸钠218.2mg。Gill提出半氧化苏木精法，即氧化1g苏木精仅用碘酸钠100mg，这样先使部分苏木精氧化成苏木红，未被氧化的苏木精在随后的日常染色操作中慢慢氧化成苏木红。这样，染液既不会过染，又经常有新的苏木红形成补充，苏木精染液的使用寿命就可延长。! P: N n7 J; F
苏木精的氧化与下列因素有关：: o4 y( b( [0 _; }
1.苏木精染液PH值。染液偏碱性氧化快，中性时稍慢，酸性时很慢，所以加酸时的苏木精染液可延缓氧化。
0 {! x$ T- X" ?3 w/ b; I2.氧化剂的量。加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化成熟可用，自然氧化和供氧量有关。如靠近阳光、染液通风、经常摇动等可加速氧化。* V# e! c7 m. E" a* c, z# B
3.氧化时苏木精液的温度。用碘酸钠等作氧化剂时，在常温下加入即可，而用氧化汞作氧化剂时，需把苏木精液煮沸时加入才能放氧。2 M3 Q0 t4 Q. j' q/ [, O# e
三、苏木精的媒染
+ _# y: J& H) O; R9 e4 D0 O苏木精被氧化成苏木红，苏木红为弱酸性，呈红色，对组织的亲和力很小，用单纯的苏木红液染组织，和一般酸性染料一样呈弥漫性染色，且染色浅淡。但当加入某些物质如二价或三价的金属盐如铝、铁盐后，染料分子就能与这些金属盐的离子结合形成色淀（lake），这种色淀具有阳电荷，能与特定的组织成份牢固结合。这些二价或三价的金属盐就称为媒染剂（mordant）。用作媒染剂的多是二价或三价的金属盐如铝、铁盐，也有采用碘、钨、钼、锂、铅和铬等。
6 X0 P) r& x3 ]8 g# e: [+ f常用的媒染剂有：0 }! Y! M2 a4 ~2 _
硫酸铝钾又称钾明矾 K2SO4 • Al2(SO4)3 • 24H2O ) b0 ~2 \+ q' K( E; j7 R) K/ z
硫酸铝铵又称铵明矾 （NH4）2SO4 • Al2(SO4)3 • 24H2O
$ ^" X- ` ]* L! c! e8 x& L 硫酸铁铵又称铁明矾 （NH4）2SO4 • Fe2(SO4)3 • 24H2O ! q E! ?$ g& |! r/ Y( P
硫酸铝 Al2(SO4)3 • 18H2O，
3 A" e- N1 B7 @4 [ { 三氯化铁 FeCl3 • 6H2O) l1 R# N8 e8 Y% q1 i# P
苏木红和这些金属盐结合形成蓝紫色或者蓝黑色的色淀，这些色淀和胞核结合得很牢固，用水或乙醇均难以洗脱，Weigert铁苏木精染液更可以作为耐受酸性分化和用较强酸性染料复染的首选胞核染料。
* X& }( K( E# v9 r从苏木红的结构式看，原有助色团羟基，又有了发色团醌型苯环，应属一种酸性染料，但由于酸性助色团羟基的酸性很弱，对组织的亲和力较小。加入媒染剂铝盐后，铝盐与苏木红螯合形成蓝紫色的铝-苏木红色淀，该色淀呈强盐基性，带正电荷，作用相当于碱性染料，即带正电荷的蓝紫色色淀和带负电荷的胞核脱氧核糖核酸磷酸基进口极性吸着而完成染色。
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* ^0 {. D; T+ L3 v$ J四、各成分作用, ?' c+ C" Q% D
1.氧化汞、碘酸钠：作为苏木精的氧化剂，使无染色力的苏木精氧化后转变成有染色力的苏木红。7 W& ]* u* B+ |: g* }" l. S/ F$ p
2.硫酸铝钾、硫酸铝铵和硫酸铝：作为媒染剂，其三价铝离子与苏木红结合形成蓝紫色的色淀与细胞核内核酸的磷酸基牢固结合。 & i% a" |3 g! @; m3 j0 d! g' U
3.无水乙醇：较快溶解苏木精，并可抑制霉菌生长。0 h' ?, y. Z* {1 n
4.乙二醇：也能较快溶解苏木精，抑制霉菌生长，其沸点高（b.p.197.2℃），苏木精液不易挥发。
* R& _' ?9 w3 D" [ M2 [7 I, [ D6 }5. 甘油：作为稳定剂，延缓苏木精染液蒸发，防止苏木精过度氧化，延长苏木精液的使用期。+ Q5 e3 c& M2 d5 l0 r7 s' l! j. X" ^* v
6. 冰醋酸：可抵销氧化剂的氧化，使苏木精和苏木红保持均衡。同时又可增加胞核的选择性染色，使胞核染色质显示得清晰细致。
6 _8 R9 R/ f8 ]5 O1 r* S7.柠檬酸：作用和冰醋酸相同，加入柠檬酸1g，相当于冰醋酸20ml。
9 q P7 q) N$ J+ I" c# g3 O0 `& f8.水合氯醛：起保护剂作用。
2 Z6 i; h4 o, y5 }, D五、简单介绍一种配制——鄂征的改良Mayer法
7 v+ X. y0 g, I/ p6 _3 q0.5g苏木精，5.0g铵矾或者钾矾，0.1g碘酸钠加温溶于70ml蒸馏水。再加入30ml甘油，2ml冰醋酸。混匀过滤后为母液，用蒸馏水按1:20稀释即成工作液。 |
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发表于 2010-11-19 20:27
