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细胞内酸性磷酸酶染色, P* Z) Y' g3 K) _
acid phosphatase in cells ,(ACP)) M5 d$ X9 T& i- E# F2 `' S6 P; z' e/ ^
. k X, C, D: R. b, ~7 `8 D8 s原理:
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酸性磷酸酶广泛存在于人体组织细胞内, 其最适pH为4.5～5.5左右 , 酸性磷酸酶通常存在于溶酶体内, 其同工酶有七种。血细胞内的酸性磷酸酶（ACP）能水解磷酸萘酚AS-BI，释放出萘酚AS-BI，后者与偶氮剂偶联形成红色沉淀物。沉淀物的显色深浅与ACP活性成正比。
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正常血细胞反应 :
& }; C( c& C' x4 W3 X4 j- ]1 V9 v# j8 }; G& D8 C) k+ g
粒细胞系-----部分成熟粒细胞可呈弥散状弱阳性, 定位于胞质内。
- r% h! g% N# C8 j6 @* T淋巴细胞系-- ①部分T-淋巴细胞可呈粗颗粒或小块状阳性,定位于胞质内。; F2 {* k- ?. a
②部分B-淋巴细胞可呈细颗粒或弥散状阳性,定位于胞质内。% i3 l' v& E' `; ^
$ t$ ]9 z0 O' c单核细胞系---部分单核细胞可呈弥散状弱阳性,定位于胞质内。
5 Q! c- B5 O9 |0 @4 ~ F% T巨核细胞系---巨核细胞和血小板可呈弥散状弱阳性, 定位于胞质内。( c; a. k2 Z7 R3 V$ ]
网状细胞、吞噬细胞、组织噬碱性细胞可呈弥散和/或颗粒状阳性,定位于胞质内。$ k1 H! B, t3 O" a4 K" J
红细胞系----基本呈阴性.
5 ]* N! D1 W0 p: x3 D+ n) N病理变化:( h1 v4 E3 J; i% |3 P/ Y/ ^
0 [. J$ \4 J3 I& H% I; a( C C 酸性磷酸酶在T-淋巴细胞异常增多时都具较强的活性, 特别在急性T-淋巴细胞白血病时最为显著, 但对L(+) 酒石酸敏感受其抑制, 在B- 淋巴细胞异常增生时, 多数为阴性或弱阳性反应。而多毛细胞性白血病可呈较强的阳性反应, 且因含独特的同工酶5,不被 L(+) 酒石酸所抑制。所以酸性磷酸酶对多毛细胞白血病的诊断具重要价值。
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在急性非淋巴细胞白血病中, 单核细胞系统反应比粒系细胞系统较强。多发性骨髓瘤细胞、浆细胞均可呈强阳性反应。另对高-雪细胞和尼曼-匹克细胞的鉴别有较重要价，通常高-雪细胞呈强阳性反应而尼曼-匹克细胞呈阴性反气应。
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临床评价 :
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1. 结合电镜超微结构检查, 可对多毛细胞性白血病作出诊断。
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2. 结合细胞免疫表型检测, 有助于区别各种B-细胞克隆增生性疾病 , 如慢淋与毛白、B-ALL与毛白。7 q$ I* V. o7 U# \& c3 a
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3. 结合其它细胞化学染色,有助于对急性粒-单细胞白血病亚型的分类。/ `$ H) Y, o1 F9 a! k
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操作步骤:% Z1 }& D) R) ^9 z" T4 v2 b
! c2 ]9 i+ X2 ~ h( ?- [ 将新鲜涂片滴加固定液5～8滴 ，盖满血膜即可，（4℃）30秒水洗备用。将ACPⅠ液、Ⅱ液加入ACPⅢ液中混匀(可先吸取少量ACPⅢ液分别置入ACPⅠ、Ⅱ液内，待ACPⅠ、Ⅱ液充分溶解后再一起置入ACPⅢ液内)成为基质液。再将涂片置入后，37℃放置90分钟，流水冲洗数分钟。苏木素复染1～2分钟，水洗待干，镜检。1 w! s* E$ e% q8 b$ G- I
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结果显示：
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阴性 —（–）胞质无沉淀物（无色）
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$ |1 S9 i" z& `" v) O阳性 —（+）胞质见浅红色或有少量细小颗粒。3 W3 D/ O% Z, y" l) ^
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（++）胞质见红色或有较粗红色颗粒但小于胞质1/2面积。
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（+++）胞质见粗大红色颗粒，可达胞质面积3/4以上。
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2 y+ F# l# N* ~8 s8 s- p（++++） 胞质见粗大深红色颗粒，达胞质全部面积。
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注意事项:
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1. 由于含酸性磷酸酶的血液细胞有许多, 且各种细胞所含ACP同工酶不同, 即同一基质可有阳性程度的差异, 在同一类细胞中可因基质不同而使阳性结果存在明显差异, 特别在不同的实验室之间龙为突出。
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/ |/ _7 J" D( k5 O/ m6 d2. 在每次操作时均应设正常标本阴、阳性对照。, C' F1 x6 k+ k& a
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3. ACP染色结果以弥散状阳性出现的细胞较多,如为弱阳性反应, 在复染时应注意在涂片纵向复染一半, 另一半不复染以利弱阳性的观察。9 \# Z u, A% S: w6 t+ z
0 ~2 q# @% t, ]8 e# E' S4. 实验室操作人员最好相对稳定，尽量减少室内误差。2 A/ E; n* Q" A, d
' I$ ]1 O3 ^% @ a0 B# S5. 观察结果时需注意涂片的部位,最好选择体尾交接处,有时不同部位其阳性强度可相差二个(+)以上。作L-酒石酸抑制实验时需特别注意。
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4 M) F$ U. M0 G7 _常见问题与解决方法：
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8 X$ D7 } j. a! p# e4 p常见问题1 M9 v/ v$ u+ t$ H v
原因7 p8 b3 S5 k: ^
解决方法
2 O0 D; Q3 ~2 I# e; K未见阳性或阳性减弱：$ L5 a/ M) @' R5 q
试剂盒过期太久 从新购买试剂盒; T0 E4 V' \' D2 {( _0 S
载玻片未洗净标本被污染 取干净玻片从新采集标本! `( ?. E6 t1 z: v$ I- ?
标本放置时间过久且未固定 * {6 B. l+ [4 K" @
从新采集标本并立即固定，在三天内检测完毕# o' O; O4 l: e) ]" D
9 D5 E5 P i# L* }8 ]: t固定液使用时大于4℃ 另取标本重新用4℃固定液固定5 P4 I0 @& `# K9 N
采用了加有抗凝剂的标本 从新采集标本$ o! g5 ~. O8 c" G* M$ I7 n
标本沾遇其他化学物质乙醚、二甲苯等 采用未被污染的标本重新染色
& ~2 {: O c; i" T$ n试剂配制时Ⅰ 、Ⅱ 液未完全置入Ⅱ液内或未完全溶解 需取新试剂从新配制" {! l# N6 U4 p- m5 h
试剂配制后未及时使用 需取新试剂从新配制: I B$ o0 ~8 t7 w
孵育时间或温度不够 调整温度或孵育时间, `/ j8 D0 a4 S
, `2 Y! R% h) L4 P: H染色背景太复杂：
, Y/ R. b8 N: T; Q背景细胞染色过深 孵育时间太长，若影响观察需另取标本重新染色( f) U; `% n) B+ J% y( M$ B7 W$ s( ]
染色后冲洗方法不当
9 N3 p4 Y7 p4 y- X不能先倒掉染液，应连染色缸置流水冲洗染液，2～3分钟
, i8 H* W0 H: S. t0 j复染后水洗时间不够 复染后水洗时间通常为3～5分钟而且须连复染液一起冲洗 |
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发表于 2010-11-25 09:13
AS染色在红细胞疾病中具有较大的使用价值，在大部分红血病、红白血病及部分重型海洋贫血等疾病中可呈强阳性反应, 部分缺铁性贫血、重型海洋贫血、MDS、骨髓硬化症等可见阳性反应。其它类型的贫血如巨幼红细胞性贫血、再生障碍性贫血、溶血性贫血等均为阴性反应。