染色专题汇总——冀望集大家之力整合现行所有染色剂，从细胞到分子，从配方到原理~

deron

, N/ C! {! O. O0 Y. z# `0 q$ K

- w' {' t& P2 k7 k1 X坛子里总是卧虎藏龙的，第一次搞这种集合贴，希望大家鼎力支持。
+ m6 U( ~, U- ^+ u4 \: y% ]6 P9 ^9 L" m“台盼蓝、瑞氏、茜素红、苏木素、油红、溴酚蓝、HE、碱性磷酸酶、vokosa结节染色、免疫荧光染色、阿尔辛蓝、考马斯亮蓝、ACP染色、AKP染色、Brdu 染色、免疫组化染色、结晶紫……”& a0 Y! n2 b6 Q9 c. ]- M* x3 @' f
从来没有注意到有这么多的染色剂，自己用到的也是屈指可数，掂量了很久，决心整理出来一份完整资料。3 Y! p8 Y) B* N/ ^
希望大家多给资料和意见~

deron

最近手头事情太多，专题进展不大~~~; K! Q( L& k5 A5 y0 d  M) ^
今天把之前大家奉献的染色技术罗列出来，方便大伙儿继续补充——最好是亲自做过，对原理和步骤有大体掌握。
6 V7 F2 |6 H- X, w1.台盼蓝染色——————用于细胞凋亡检测——整理者：deron' k5 `1 h! q- ^1 j2 ^
2.Hoechst33342————用于凋亡的染色剂——整理者：yuhaoze6 X* ~: G1 `3 K+ U/ W& ]0 [9 M* B
3.考马斯亮蓝——————用于蛋白质染色——整理者：jhu132llh(八卦一下ID名：jhu一生爱llh？)4 \+ B1 a' r- g- W4 ~& r) M
   苏木精染色——————用于细胞核染色
; J- a# u* H) b9 U/ U3 g4.瑞氏染色———————用于细胞染色，区分核质——整理者：deron7 e: Q3 T; p% g, E* ?' Y& Y
5.碱性磷酸酶（ALP）——用于成骨细胞钙节指示——整理者：lipd09@mails
: @0 [, m8 S6 l" `, M5 Z5 i  }6.吉姆萨染色——————用于细胞染色，区分核质——整理者：deron) g3 y* w9 V" S8 I; z1 `
7.Hoechst33258————用于细胞核荧光染色——整理者wang2004k2006* v' L9 T4 y% }9 L
8.革兰氏染色、结晶紫、过氧化物酶（POX）、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）、细胞内酸性磷酸酶染色（ACP）、氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-DNCE）、alpha-醋酸萘酚酯酶染色（alpha-NAE）、alpha-丁酸萘酚酯酶染色（alpha-NBE）、过碘酸-雪夫反应、铁染色、白血病细胞免疫分型测定————大多是检验科室用来检测细菌及细胞类型，来自于医学教育网http://www.med66.com/——整理者：zuming5 X4 j4 V" x- L% c  H
  石蜡切片免疫组化染色、DAPI染色、Rhodamine123染色、Fluo-3-AM染色——整理者：zuming
) w# l5 w/ G( u3 j8 A, O. \% n! D/ r（zuming童鞋的很多格式转自网上并不规范，第八条的所有技术步骤大家均可以根据自己做过的实验情况重新整理一下）5 t" Y1 L. ^3 H, V/ s
9.H&E染色——————用于细胞染色，区分核质——整理者：deron

deron

HE染色，这里有一个火热的版本。
3 h4 g% }) v% A) V1 d! E很好很全很强大~
, b+ v4 I5 @% t% H4 x8 i 成品——HE染色protocol.pdf (243.1 KB)

2010-11-26 15:23 上传

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deron

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( C# f( W& v8 f- ^, m! ?
关于伊红(eosin)
$ p; }8 |5 D& F; O
& l% H+ u9 O3 Z" g1 _1 M伊红为酸性染料。微生物学实验中，用于鉴别产酸性细菌的一种培养基添加剂；细胞生物学中常用于细胞质和细胞间质的染色——因伊红为酸性染料，易结合嗜酸性的蛋白质（即碱性蛋白质）。
8 G: b( X3 z& l& H7 n
5 ]% o# D$ Y+ }- @' q3 Z$ G9 c4 |  G# Q
伊红分水溶性的和醇溶性
; N- c) t6 h8 D1 y+ M" @4 J- u' M# R/ ~+ e& Q
伊红——水溶性
6 N4 j( z! k. h0 N+ v. Y9 b/ d  G* A, ~$ I2 _
C20H6Br4Na2O5 ——分子量691.86
( G" _3 M0 p5 Y: `/ k; z性状：红色粉末，易溶于水，溶液呈绿色荧光，能溶于醇。   Z- \7 d9 K8 p  I# m
用途：组织学用于上皮细胞、肌肉纤维和细胞浆染色。
1 |+ j1 R; G8 P4 O. `
1 v" r* `5 ~& N& S, | 3 i: z8 L3 r' M' V2 m, l& T' d
伊红——醇溶性
/ X$ q2 A# t7 i& x: ?- J8 |$ }$ w+ J# D8 `
C20H8Br4O5——分子量647.98 ?6 Q7 Q2 Y6 O* q# Y
性状：红色结晶状粉末，能溶于碱，微溶于乙醇，不溶于水。
4 e# e5 D0 i2 P0 ]3 z用途：吸附指示剂，检测F离子，定量分析滴定溴离子和碘离子。% P9 x9 `( [. z0 u0 K

" h9 I( R! X$ r8 b2 }% `最简单配方：
$ {/ n2 U. f' b. B% B/ N伊红 （醇溶性）1g ，75%酒精100ml，加几滴冰醋酸至半透明状。 2 ~. {; `4 H1 C, |8 z% ~
伊红 （水溶性）1~2g ，蒸馏水100ml，加入几滴1～2%冰醋酸。

zuming

回复 43# deron
( p: I" _" j' b对不起，您的帖子从发表到现在已超过 30 分钟，不能再进行编辑，请返回。  a, K+ c, x+ k7 Z0 i
怎么这样啊！哎！

deron

回复 42# zuming
3 M. ~) i4 S6 {4 G" S; t' h* c

" T9 C: O! I+ r    宁缺毋滥，有些格式需要整理

zuming

回复 41# deron $ v# I4 l" X2 G9 K+ J
能找到的资料就往上贴了

deron

回复 21# zuming
" n  ]# R+ U# {0 x7 J
1 b6 {4 k/ u0 D$ \4 Z) \+ w& H6 e5 Z/ w. b# ~
    太给力了，zuming兄

deron

神马情况？不能评分了……

zuming

Fluo-3-AM 染色 & i3 z5 Y& h" r/ o
(测细胞内游离钙离子浓度)
. h) h4 y+ X2 i, p  F& [原理：( f4 C( h0 K0 e. b
AM酯的羧酸经修改不带电荷，易浸入细胞。一旦进入细胞，亲脂性集团被非特异酯酶切断，使其带电荷，从而溢出细胞大大减慢。一般，酯化集团水解对于结合靶离子是必须的。AM酯水解显颜色或荧光的特点可用于检查其自发水解。
4 l0 P; \9 H& S" I+ ]1 C
. o! ?/ W- ]+ n' D% C$ a保存：/ Y5 Q) D# `" r% }
指示剂干燥避光4℃或-20℃可长期保存。
& g( p4 y1 t' H- \" b4 `$ KAM酯易水解，发货瓶中至少可放六个月。
7 _0 ~& E- _2 f, F8 e" j8 H- l; {' f0 L用时AM应溶解于无水DMSO，并尽快使用（一周内），否则细胞运载能力下降。AM的DMSO储备液应避光、冷冻、干燥保存。盐的储备液应用蒸馏水或缓冲液制备，冷冻-20℃避光保存，可放6个月。
/ v1 k6 P* f. m! j: J应用：3 Z6 L7 p. @, r; w
用细胞浸透AM酯运载技术：. j; }+ p; i$ N' I
1.在生理缓冲媒介中将DMSO稀释至1-5μM。不可用含胺的缓冲液如Tris。- M" M" r5 W+ Z6 S+ I
2.有机阴离子转运抑制剂苯甲酸（1－2.5mM）或sulfinpyrazone(0.1-0.25mM)可加入细胞外液以减少指示剂去酯后的渗漏。苯甲酸和sulfinpyrazone是很碱性的，所以之后要重调pH值。
9 J" I  M$ U4 V% j  A3.AM酯孵育细胞一般在20－37℃，15－60分钟，准确的浓度，时间和温度靠经验摸索。AM酯运载技术有一个内在问题即亚细胞隔阂，降低孵育温度可以减轻这一副作用。
( X/ b* v4 b0 b; r3 q4.检测荧光前，建议细胞最好在无指示剂媒介中（最好有阴离子转运抑制剂）洗，以去掉细胞表面的非特异吸附的染料。而后再孵育30分钟来进一步使细胞内AM酯完全脱掉。荧光素泄漏引起的背景高可以在实验前在细胞外加入抗荧光素抗体来防止。% h! p8 g$ f7 B1 X3 r9 J% w
目    的：测细胞内游离钙离子浓度
; I; R  I' O5 |( l0 d5 Q& t, J0 dEX/EM：探针在细胞外液无荧光，进入细胞后最大激发波长和发射波长为464/526
+ O% G" _) F/ m7 U$ G& V; X; f, g/ G/ O+ L* |: J
方法一：4 b% I( B; v: x1 t: @8 L- l) j
染液配制：Fluo-3-AM 50ug溶于45ul DMSO(Fluo-3-AM浓度 1mM)，15ul/支分装，-20℃保存。染色时用15～50mM HEPES缓冲液将其稀释为1～20uM(如1.5ml 为10uM)。, n( {* [5 o$ [% |7 y
染色步骤：+ Y1 O% O/ c$ ^
培养细胞2 s3 g! j* z! ~4 s9 N* V
$ q0 q7 u1 L0 ^- C; M* P: L
缓冲液漂洗2～3次
3 W) ?# C$ `# b1 ?; ]  Y% m) ~
3 G$ R. @! H$ M1 EFluo-3-AM (1～20uM) 37℃或室温孵育0.5～1小时
; y/ \  O- _/ J) p
; w3 O6 D9 M( C1 N- P缓冲液漂洗2～3次
5 W" A) E$ U4 C, W! Q- t6 \. Z# d0 \: A
加0.5ml 缓冲液，上机测量