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苏木精染色8 x0 b1 L# v, D8 g) z% s
【中文名称】苏木精
4 P% L, Q$ l7 c& T2 a- u【英文名称】hematoxylin;h(a)ematine: X* D, f9 \ T j E2 ~
【性状】
( G: z+ C3 p# C5 r8 V, L* i$ d- @ 无色棱形晶体，遇光变红。' Z6 b; `. G* t5 o. x
【溶解情况】
8 C9 J% D; U6 \5 S$ v7 a' l 难溶于冷水和乙醚，易溶于热水和热乙醇，溶于碱、氨和硼砂的溶液。
7 a0 z4 p+ H$ h3 ?$ j- |2 m【用途】
8 _4 `% n# F* ~1 h* p 一种天然媒介染料。用于蚕丝、毛皮和皮革的染色以及棉布的印花，用不同的媒染剂可得到蓝色或黑色。与重铬盐、铁盐、亚铁盐、铝盐和锡盐等一起可制成各种色淀。在分析化学中用于比色分析、显微镜分析，并用作pH值指示剂，变色范围5.0～6.0，由黄色变紫色。苏木精(hematine)为碱性染料,将细胞核染为蓝色;* {; D% v4 A3 b9 ^5 v
【制备或来源】$ O6 W7 y( X" c- K; w
由苏木树的木材获得。
: y3 `# [% O1 @/ R( c' F; ]. A【其他】
4 s: X- [' _4 t 含有3分子结晶水，在100～120℃溶于本身的结晶水中。在水溶液中，特别是在碱溶液中易被空气氧化成红棕色的氧化苏木精。
+ e, [) x& y/ V; w 常与伊红配合，苏木精将细胞核染成蓝色，而用伊红（署红）将细胞质染成红色。
: r+ s6 ?5 ~8 m# m 溶液要避光保存。
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配方：; A( X- |0 }4 [0 x+ ^% U* B
苏木精的染色液有很多，如通用的苏木精染色液和各种改良后的苏木精染色液等等。4 f0 @/ H6 H; i8 ?2 }1 d3 O
一，改良的苏木精染色液一
# }3 o. b" W3 j$ Q# Z- n5 p7 j 材料 苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝10g，蒸馏 水750ml，碘酸钠0.5g，柠檬酸1g。方法 将苏木精溶于无水乙醇，将硫酸铝溶于水，两液混合加热煮沸2min，加入碘酸钠及柠檬酸。优点 此液存放时间长，染色力保持时间长，染色效果好。5 B' [6 D5 d. s: L+ L
用硫酸铝替代钾明矾染液久放也不会产生沉淀、结晶，不用过滤即可使用。此液存放时间长，染色力保持时间长，经过我室比较，使用时间可比哈瑞氏苏木精染液长一倍。1g苏木精配置的染液是哈瑞氏苏木精染液的两倍，更加经济实用。此液染色效果好，染色时间3～8min，特别是染色质显色清晰，但应注意一些染色技巧，配置盐酸酒精分化液时，浓度稍低，一般控制在0.8%左右，分化时间稍短，应在30s之内。氨水配制成1%，返蓝时间要较长，一般控制在1～2min，充分水洗后再进行下面的染色。
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! V4 Z: _1 x+ {7 {0 |# u' Q: R( E二 通用海登汉氏苏木精染色液
( u( b! z5 q" \& L2 U7 L" y海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。
7 T; Z( b$ b" y" g+ m配方：甲液（媒染剂）： 硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml （必须保持新鲜，最好临用之前配制）。* H: D5 U0 X8 N, u" e
乙液（染色剂）：苏木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸馏水 90ml & E( E- }+ J! K1 }$ Z
配制步骤：# E$ e# {) n, p- _- {& K8 e2 ]+ Y
（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。5 o/ V. s& V& z2 }0 @+ L
（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。 3 a8 L- G: I1 r3 M+ h
切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。 铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。
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. h" u5 W5 [, L1 u" B- c8 e配方三：苏木精水溶液
3 P& P5 [7 J" n$ E: n0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。 * m- h+ e& _% |* h8 [ \' v
5 d, @; r" J+ j9 K% R# w) \! I: R: z配方四：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin） $ F4 W) m3 _2 b2 y" ]
甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml
% g! Y6 S" H& r5 B+ p3 o h乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml
. P, Y4 ^) O! z丙液：甘油25ml + 甲醇25ml 1 n" q' B" z! C+ R$ s0 F4 J1 [
分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
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: n4 W0 r( @/ `5 I- t配方五：爱氏苏木精（Ehrlich’s haematoxylin）
5 ?, }0 m# y/ ?苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾（钾矾）3~5g。配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。
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# j' `! G y J染色方法：6 c8 M8 h) d. K4 u9 `" U
一 石蜡切片的苏木精-伊红染色法# m" O4 D2 I. l( c# G
（1）切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。
0 B: N k# g3 j- [% h（2）移入二甲苯和纯酒精（1∶1）混合液中5分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可略）。! z' n s7 s* |% S
（3）入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。最后经蒸馏水转入染液。! {, o2 g0 C; d8 |& w! v8 y4 w
（4）苏木精染液染色5～15分钟。、7 I. [* c& \; {9 e/ I7 o
（5）水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精（70％酒精配制）分色片刻。镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。
6 |/ \1 s$ ~/ Y: Q/ y5 s（6）流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色。（7）蒸馏水短洗。
' I/ r4 H2 F p（8）0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。) V/ t a4 z) N' t
（9）依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。
) I- d. G9 ~3 J" J/ M) l* `: n（10）二甲苯透明（二次），共约10分钟。
1 y: R6 r- ^ C1 r8 K1 L" O1 t+ K（11）封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。
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还有其他很多的苏木精染色的方法，主要是用于对染色体的染色，基本方法都差不多，大家实验室都有我就不啰嗦了。 |
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发表于 2010-11-17 14:03
发表于 2010-11-17 16:17
