染色专题汇总——冀望集大家之力整合现行所有染色剂，从细胞到分子，从配方到原理~

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考马斯亮蓝染色
1 u6 g8 |2 q# g* F" x1 p& B! K: A* A8 n" V5 u
配方：. B6 y: a) Z5 ]; T7 E- F
考马斯亮蓝R-250染色液配方如下：
; V- r( M( i( a1 z8 K0 M; Q3 j考马斯亮蓝R-250    1g8 g- p  e2 i! o3 N! m
250ml 异丙醇% o, U$ _& U  l
100ml冰醋酸
0 o" Q3 a7 @6 T! e" R6 V; O. d# t加650去离子水
2 v. j8 z0 w* D: r; _6 t# a$ F6 k3 k  r2 q0 X7 q$ P/ }) a8 z: ]
考马斯亮蓝染色法是1976年Bradform建立。考马氏亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质结合后，变成蓝色，最大吸收波长从465nm转移到595nm处，在一定的范围内，蛋白质含量与595nm的吸光度成正比。大大提高了测定蛋白质的灵敏度（1ug）。
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染色方法：  e2 C& J5 {7 `7 M  L" L% @+ E$ H
1. 常规染色脱色方法：9 U; K+ a) z0 x- b. E
a. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
# f$ W# a3 `5 U5 h  W. F3 {% F, J' bb. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。; u: R" W7 p3 O0 D, ~% b5 @$ E
注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
. a* j- U# I  V5 n1 w2 M( o) Y' Cc. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。0 Q3 e( [, c; E
d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
5 A! I$ G, o4 D1 \) y8 n' p) Ye. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。
4 c3 Z, `2 x6 i  I! ]注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。4 p: x+ B: m1 D7 z
f． 完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。
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2. 快速染色脱色方法：
8 H8 Z* O# {7 m1 }. Ya. 电泳结束后，取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。通常对于胶浓度大于10％的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对于胶浓度小于10%的胶，宜尽量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。
5 u9 [9 ?- C5 |+ \b. 随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动5-10分钟。
1 l9 z4 T6 L; C+ V) Xc. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。( W6 O& `2 R) x7 j% ?1 `7 H# y
d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
9 m7 Q( Z: r0 u8 O8 O! M  ue. 微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。- V( H. h( ~1 h% j9 J. r4 o
f. 随后在脱色液温度较高的情况下，在摇床上摇动5-10分钟。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
2 q- I4 Z2 {4 J" \( Wg. 更换新鲜的脱色液，重复步骤e和步骤f，直至蓝色背景基本上全部被脱去，蛋白条带染色效果达到预期。
- n, l7 B9 S% B1 rh. 完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。
; v5 N/ a$ l8 f( [: c, s另附：常规染色脱色方法耗时较长，但检测灵敏度更高，染色效果更加稳定。快速染色脱色方法通常检测灵敏度略低，并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况，需特别注意。另外微波炉加热导致的高温会引起染色液和脱色液中的乙酸的挥发，最好能在通风橱中进行。

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苏木精染色
( L. p5 x7 f+ ^2 n* T. \【中文名称】苏木精
9 }, ^0 v( D- H' x! b" J5 T【英文名称】hematoxylin;h(a)ematine: c; G. q- _$ t: H: P! e
【性状】
. `7 h' u+ m+ E3 a3 e  C3 ?; j- |7 \. ^  无色棱形晶体，遇光变红。0 z% g+ h5 A4 y
【溶解情况】* ?- j5 ~( V+ H, n! l
  难溶于冷水和乙醚，易溶于热水和热乙醇，溶于碱、氨和硼砂的溶液。. k& L5 p6 k* V3 f  A9 H
【用途】' D( F9 o6 \- {
  一种天然媒介染料。用于蚕丝、毛皮和皮革的染色以及棉布的印花，用不同的媒染剂可得到蓝色或黑色。与重铬盐、铁盐、亚铁盐、铝盐和锡盐等一起可制成各种色淀。在分析化学中用于比色分析、显微镜分析，并用作pH值指示剂，变色范围5.0～6.0，由黄色变紫色。苏木精(hematine)为碱性染料,将细胞核染为蓝色;( O$ b& A5 u$ u1 A. f7 G- e
【制备或来源】
; t$ Y! U" O! P: t  由苏木树的木材获得。
, r: S$ o4 ?& S7 }' t【其他】; e- ^* b! }2 p
  含有3分子结晶水，在100～120℃溶于本身的结晶水中。在水溶液中，特别是在碱溶液中易被空气氧化成红棕色的氧化苏木精。7 ^5 _) E$ U# C+ X5 J
  常与伊红配合，苏木精将细胞核染成蓝色，而用伊红（署红）将细胞质染成红色。
" V5 g- ?: ^) z2 w0 B3 ~1 L  溶液要避光保存。- s' c9 I3 a' ~; e

0 `5 b% s3 l+ j. V配方：
' h( a( m! }3 @% t  n苏木精的染色液有很多，如通用的苏木精染色液和各种改良后的苏木精染色液等等。0 ]$ O& d# Z  u! Q
一，改良的苏木精染色液一+ P6 c' q: m# k0 t) k' A& W
   材料 苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝10g，蒸馏 水750ml，碘酸钠0.5g，柠檬酸1g。方法 将苏木精溶于无水乙醇，将硫酸铝溶于水，两液混合加热煮沸2min，加入碘酸钠及柠檬酸。优点 此液存放时间长，染色力保持时间长，染色效果好。
0 F$ o& a) X, T* L6 X  V   用硫酸铝替代钾明矾染液久放也不会产生沉淀、结晶，不用过滤即可使用。此液存放时间长，染色力保持时间长，经过我室比较，使用时间可比哈瑞氏苏木精染液长一倍。1g苏木精配置的染液是哈瑞氏苏木精染液的两倍，更加经济实用。此液染色效果好，染色时间3～8min，特别是染色质显色清晰，但应注意一些染色技巧，配置盐酸酒精分化液时，浓度稍低，一般控制在0.8%左右，分化时间稍短，应在30s之内。氨水配制成1%，返蓝时间要较长，一般控制在1～2min，充分水洗后再进行下面的染色。  b$ r5 U4 T) l6 k& E  Z
: n. Z- E  Q  |. I& E% ]
二 通用海登汉氏苏木精染色液( f" `: f6 C: g  u! U
海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。 3 K% ^: z5 n* k/ _) M1 q
配方：甲液（媒染剂）： 硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml （必须保持新鲜，最好临用之前配制）。
( l3 u2 k8 [4 E乙液（染色剂）：苏木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸馏水 90ml & m7 o- f+ ?& Y! ?) s0 d4 f. V
配制步骤：+ e* C( i: l8 s, I) f: C
（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。7 K/ g3 e8 k: a2 N
（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。
. k5 m/ ]1 }6 e7 Y$ ~切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。 铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。# Z' o. x3 h: Y7 m
, v2 t+ {2 Y" J. @9 @
配方三：苏木精水溶液 7 b; I. \: v4 a5 M; s
0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。
0 j! G( g2 @9 n* W) Y9 O4 W" R+ ?6 }+ P
配方四：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin）
. C2 Q$ O! ?9 F甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml . D" w2 R2 t1 N
乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml
- h" F1 w+ w) `) c丙液：甘油25ml + 甲醇25ml , e$ o. g& C& i
分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
( x) n7 f+ ?+ F/ |) b3 I
: z" f% P+ C9 N4 N, w# c1 }4 [  ^0 F配方五：爱氏苏木精（Ehrlich’s haematoxylin）
6 n/ w" m. N3 g. ?2 R! ]苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾（钾矾）3~5g。配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。
) ^7 W6 W( ?( a- R; Y; |( `! h8 c. |  ^4 F& h
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5 t# J5 D% v& R9 f% R染色方法：
. C4 M5 W8 S/ l$ _' f% C一 石蜡切片的苏木精-伊红染色法
# L0 J# S0 H* y2 V# U- e（1）切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。# ~/ n' H% P2 n8 F
（2）移入二甲苯和纯酒精（1∶1）混合液中5分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可略）。5 l1 X6 l* p4 y8 C$ C, O# {/ e
（3）入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。最后经蒸馏水转入染液。4 a5 Q$ k# h1 e' M' l/ m! ?9 t1 ~: F: L
（4）苏木精染液染色5～15分钟。、( W0 e0 i2 }4 l5 W
（5）水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精（70％酒精配制）分色片刻。镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。# e% u+ L! e& s- L
（6）流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色。（7）蒸馏水短洗。( O/ g& C3 L+ v+ R
（8）0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。1 j6 E' F. E8 v
（9）依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。4 }! G0 h3 Q, K
（10）二甲苯透明（二次），共约10分钟。. P$ E& V- y5 K7 O/ p; d) k
（11）封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。: R! K+ j5 ^# N0 _

+ P8 W" z# w* x2 H4 M8 @1 a还有其他很多的苏木精染色的方法，主要是用于对染色体的染色，基本方法都差不多，大家实验室都有我就不啰嗦了。