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苏木精染色# G5 s& m+ u, j8 X1 L! R2 t
【中文名称】苏木精 _5 U4 Z# d! R
【英文名称】hematoxylin;h(a)ematine" B! y: f: ?: ~* P* e! f4 Y
【性状】
7 |8 N1 @$ r/ v! c1 P: r 无色棱形晶体，遇光变红。
B5 y- i5 m/ U' y【溶解情况】
7 c% Y5 e% d# T" n; k 难溶于冷水和乙醚，易溶于热水和热乙醇，溶于碱、氨和硼砂的溶液。$ }: o. J. L( g& h; n" o! d
【用途】) h. r, U2 b" x
一种天然媒介染料。用于蚕丝、毛皮和皮革的染色以及棉布的印花，用不同的媒染剂可得到蓝色或黑色。与重铬盐、铁盐、亚铁盐、铝盐和锡盐等一起可制成各种色淀。在分析化学中用于比色分析、显微镜分析，并用作pH值指示剂，变色范围5.0～6.0，由黄色变紫色。苏木精(hematine)为碱性染料,将细胞核染为蓝色;
' e- o1 q# _! r7 }; \【制备或来源】2 G1 I+ O4 O1 A/ l0 x
由苏木树的木材获得。( O g- B y) t: u3 h
【其他】- `4 Q7 p6 e; u; U7 A
含有3分子结晶水，在100～120℃溶于本身的结晶水中。在水溶液中，特别是在碱溶液中易被空气氧化成红棕色的氧化苏木精。+ v) t4 ^, S D7 |+ h7 W
常与伊红配合，苏木精将细胞核染成蓝色，而用伊红（署红）将细胞质染成红色。
" U/ k; I! d; _$ M) } 溶液要避光保存。
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2 C$ ?) e4 {& k配方：# i+ ~+ @+ @: w+ I @! M- b& o: y
苏木精的染色液有很多，如通用的苏木精染色液和各种改良后的苏木精染色液等等。: I A, O+ I! }8 `2 i# b+ W
一，改良的苏木精染色液一
% d5 Q1 O/ U" D1 B$ B 材料 苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝10g，蒸馏 水750ml，碘酸钠0.5g，柠檬酸1g。方法 将苏木精溶于无水乙醇，将硫酸铝溶于水，两液混合加热煮沸2min，加入碘酸钠及柠檬酸。优点 此液存放时间长，染色力保持时间长，染色效果好。0 _' \1 u; L8 ?* G
用硫酸铝替代钾明矾染液久放也不会产生沉淀、结晶，不用过滤即可使用。此液存放时间长，染色力保持时间长，经过我室比较，使用时间可比哈瑞氏苏木精染液长一倍。1g苏木精配置的染液是哈瑞氏苏木精染液的两倍，更加经济实用。此液染色效果好，染色时间3～8min，特别是染色质显色清晰，但应注意一些染色技巧，配置盐酸酒精分化液时，浓度稍低，一般控制在0.8%左右，分化时间稍短，应在30s之内。氨水配制成1%，返蓝时间要较长，一般控制在1～2min，充分水洗后再进行下面的染色。3 r: `& {9 S$ ?! c3 h& @
; }' _! g* v, ~ o二 通用海登汉氏苏木精染色液8 Z4 |$ m) s) l) [( m
海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。
$ j7 z( y1 a6 h4 U F配方：甲液（媒染剂）： 硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml （必须保持新鲜，最好临用之前配制）。) A+ O/ G. G6 _' z
乙液（染色剂）：苏木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸馏水 90ml + A; z% a0 |6 p2 g8 ^- p2 R
配制步骤：
; |" [1 G: x7 E0 h5 b A% Q& M. K（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。, {& X2 q% y) ~$ j4 `# B
（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。
- o* O1 F0 ~8 i* d切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。 铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。% z7 y0 B) [& [9 w
8 b6 j8 b4 ?& B% F配方三：苏木精水溶液
/ p% V3 a) M" ]. C. U9 R' l, w0 k0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。 ! p, X2 N' ]6 l# H# |% p) D8 n5 p
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配方四：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin）
# J, y6 ?6 x' C甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml
+ o9 J1 j) f0 H乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml
6 g* O: O9 n# I; Z1 K9 }丙液：甘油25ml + 甲醇25ml
# y m( B) y# M! G分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
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配方五：爱氏苏木精（Ehrlich’s haematoxylin） , m+ n( G; w# _
苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾（钾矾）3~5g。配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。; \- ?1 i" U) O- j. Z; z9 L& n
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1 s" I+ U: j5 Y5 k7 I, Y$ K7 T& l& H+ }
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染色方法：
5 v, I& u9 ]% [. t) ^/ d+ e# h. q一 石蜡切片的苏木精-伊红染色法
% a3 {) {) _( ?( H' H3 e* f( {（1）切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。7 d7 n3 i% m, B
（2）移入二甲苯和纯酒精（1∶1）混合液中5分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可略）。
1 f1 m7 h L$ V& m5 |$ ^4 j（3）入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。最后经蒸馏水转入染液。
5 j" o* \ J+ L W（4）苏木精染液染色5～15分钟。、0 D) X! ^; c. w& e3 i" R1 W
（5）水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精（70％酒精配制）分色片刻。镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。) Q7 j6 _! c6 \+ L+ |- ?+ v5 h
（6）流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色。（7）蒸馏水短洗。
; L4 [, R+ i$ s( y6 G（8）0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。, q5 |9 [1 k. s+ U& v! Q
（9）依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。) Y. K! R& o2 N0 U7 R& m; ?7 X
（10）二甲苯透明（二次），共约10分钟。) Y2 Q* q. s. z. v
（11）封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。/ s) G6 A! ^' F7 |. ]% \
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还有其他很多的苏木精染色的方法，主要是用于对染色体的染色，基本方法都差不多，大家实验室都有我就不啰嗦了。 |
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发表于 2010-11-18 09:37
发表于 2010-11-17 20:09
