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苏木精染色
. n- L' n6 K+ ^' N【中文名称】苏木精' A3 n# P5 |% W: t
【英文名称】hematoxylin;h(a)ematine
4 t2 U" ~ ]/ j0 h$ g【性状】" t6 ^5 H/ T3 o# B9 { J8 q$ q+ e; H6 Q
无色棱形晶体，遇光变红。
( q. l2 c5 M& }【溶解情况】
/ r8 s- u5 u1 C1 l 难溶于冷水和乙醚，易溶于热水和热乙醇，溶于碱、氨和硼砂的溶液。
! P X9 {! Q) ~3 o! `) |4 q【用途】5 d: A7 b# k6 \) j
一种天然媒介染料。用于蚕丝、毛皮和皮革的染色以及棉布的印花，用不同的媒染剂可得到蓝色或黑色。与重铬盐、铁盐、亚铁盐、铝盐和锡盐等一起可制成各种色淀。在分析化学中用于比色分析、显微镜分析，并用作pH值指示剂，变色范围5.0～6.0，由黄色变紫色。苏木精(hematine)为碱性染料,将细胞核染为蓝色;
, H$ M2 i2 f2 d! U0 P: B; W【制备或来源】
& t. m' }" g" G- b$ E& E& [9 n o 由苏木树的木材获得。
3 `- e/ k& c+ F( h- J1 S9 y4 y【其他】, |+ m1 N, y. K6 i; F0 u0 ~( d9 i/ }
含有3分子结晶水，在100～120℃溶于本身的结晶水中。在水溶液中，特别是在碱溶液中易被空气氧化成红棕色的氧化苏木精。
1 d5 Q: O2 k5 A& d( Q& D 常与伊红配合，苏木精将细胞核染成蓝色，而用伊红（署红）将细胞质染成红色。2 O* \- f7 R; I) B; [ j
溶液要避光保存。& r {9 a$ b: x& r$ p$ ^) Y
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配方：
+ A5 @3 r4 m, L' x# o( F$ S( Y苏木精的染色液有很多，如通用的苏木精染色液和各种改良后的苏木精染色液等等。
2 c: l6 n' p& k7 t1 G' H5 [' w一，改良的苏木精染色液一
! ^. h D0 l1 I' t2 k 材料 苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝10g，蒸馏 水750ml，碘酸钠0.5g，柠檬酸1g。方法 将苏木精溶于无水乙醇，将硫酸铝溶于水，两液混合加热煮沸2min，加入碘酸钠及柠檬酸。优点 此液存放时间长，染色力保持时间长，染色效果好。
5 }# C" t: B$ {/ o9 E 用硫酸铝替代钾明矾染液久放也不会产生沉淀、结晶，不用过滤即可使用。此液存放时间长，染色力保持时间长，经过我室比较，使用时间可比哈瑞氏苏木精染液长一倍。1g苏木精配置的染液是哈瑞氏苏木精染液的两倍，更加经济实用。此液染色效果好，染色时间3～8min，特别是染色质显色清晰，但应注意一些染色技巧，配置盐酸酒精分化液时，浓度稍低，一般控制在0.8%左右，分化时间稍短，应在30s之内。氨水配制成1%，返蓝时间要较长，一般控制在1～2min，充分水洗后再进行下面的染色。
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5 d, [' p4 |$ }& E5 u. _9 Y5 L二 通用海登汉氏苏木精染色液
6 G7 X/ s: [. D! K# H海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。 4 g$ z8 }2 s( M Y( N
配方：甲液（媒染剂）： 硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml （必须保持新鲜，最好临用之前配制）。$ ^( K1 ^9 Q5 x0 h
乙液（染色剂）：苏木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸馏水 90ml
8 v4 w0 o6 t1 Q1 y配制步骤：' m- t! n4 r0 _8 O; r
（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。1 [" a' y$ q8 N% _" L% B
（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。
0 \* c' X: B1 O& A; E切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。 铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。
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- N8 ^) {6 e- \& H# r. Q3 ~配方三：苏木精水溶液
' m! y- A# e) z8 p+ j" w4 \$ v" o, J5 ?0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。 , H. z7 J# C+ o+ N( Z$ t
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配方四：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin） " R& I( S% p' j6 P
甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml
/ O( o D& K$ D: @' K5 e乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml
4 \' O# R; D0 K7 Y! M! \& n3 V丙液：甘油25ml + 甲醇25ml
$ {9 \' J4 b. J6 a) @, l分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。 d- V* F' |( `& ^1 ?8 k
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配方五：爱氏苏木精（Ehrlich’s haematoxylin） + t1 e3 Y. C9 R9 D* _' r- T- s" ~ d7 j
苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾（钾矾）3~5g。配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。 u& N% Y, b, }1 c! C8 h
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染色方法：9 ?& X% t k7 `- g5 Q9 F+ ]
一 石蜡切片的苏木精-伊红染色法
$ [# m6 g0 s% D3 V6 v# d（1）切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。6 }" W8 \# B, k0 n" o, I% d
（2）移入二甲苯和纯酒精（1∶1）混合液中5分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可略）。
9 ]5 f# H9 u1 J/ M（3）入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。最后经蒸馏水转入染液。
1 h" K" o0 X: X. c5 c* k* B0 l（4）苏木精染液染色5～15分钟。、
\0 C; c: ^9 M3 a( J8 j（5）水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精（70％酒精配制）分色片刻。镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。
: {, G2 t- R l7 E/ H3 z（6）流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色。（7）蒸馏水短洗。
' v, b( G7 r& R: b（8）0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。0 G" ]% }) K, w4 M
（9）依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。- o2 f7 L7 X$ }( r
（10）二甲苯透明（二次），共约10分钟。
* P5 N) w) V. i6 |6 D2 i0 n（11）封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。& Q2 d' |; \7 U v
+ h' t$ I: ^7 V- z0 b" A9 z还有其他很多的苏木精染色的方法，主要是用于对染色体的染色，基本方法都差不多，大家实验室都有我就不啰嗦了。 |
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发表于 2010-11-18 09:37
发表于 2010-11-17 20:09
