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实验室常用染色液配方
0 t1 ], h% Z+ i) C2 v0 G3 z3 ~; \- l+ q- ]* {& w
4 Y8 c4 N% J! e/ l+ H
1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液
6 i3 [* |7 s9 d7 D* H) c3 |$ j( jA液:美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精 毫升9 _8 G) A0 l$ w# C. M+ A
B液:氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水 100 毫升分别配制A液和B液,然后混合即成。, s s( \$ z6 J" W2 `2 Q" j
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液* m' s! h, I& v$ f
A液:碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精 10.O 毫升! z6 c3 U" T' y2 s7 z4 Z
B液:石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水 95 毫升: M% r0 ?# l, W, P
将碱性复红溶于95%酒精中,配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中,配成B液。将两者混合即成。6 ^3 D0 ^& h9 o" P; {) V
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液:结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精 25.0 毫升
' ~9 `! l' H/ K7 C! T1 A9 }+ Z x- {B液:草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水 100 毫升
; I6 Y3 M7 |1 s! n: T将结晶紫研细后,加入95%酒精,使之溶解,配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水,配成B液。两液混合即成。2 I3 P" V2 Y, Y1 |5 [
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘 1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水 300毫升. _- C4 Z( ]& ~7 L
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,溶时可稍加热,最后加足蒸馏水量。% }6 d6 a J- r7 q0 s
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克 蒸馏水 100毫升
0 i7 A/ A J9 m k0 l* f' t; J0 S6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水 100毫升先将孔雀绿研细,加少许95%酒精溶解,再加蒸馏水。/ |. i9 ^5 R+ b, l. n% ]
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水 100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟,加入福尔马林作为防腐剂,用玻璃棉过滤。
5 T, g) M( M- d( u8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水 100毫升
; ~7 Q3 n8 [9 I b" a* p" |. c9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水 95.0+ t5 c" y- `4 D. M0 N8 M7 h3 m
10、乳酸石碳酸棉蓝染色液(真菌制片,短期保存)石炭酸 10.0克 甘油 20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升 棉蓝 0.02克蒸馏水 10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化,加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,溶解即成。1 a" s/ J. I/ x$ p) p( v& W
11动物组织石蜡切片染色方法* P9 U5 a" G) A( k
苏木精-伊红(HE)染色:二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min,依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min,蒸馏水洗;入苏木精染液10 min,盐酸酒精分色4 s,自来水洗10 min;依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min,入伊红染液染色10 min;入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明,中性树脂封片.8 V O! w# M3 H$ _# @3 f! N) E/ x2 Z/ W
( k# N6 w4 T+ N
1 t5 d* M3 ^" G4 e! Y$ ~一、常用染色液的配制 + j6 U, e, T8 h) | y1 d
⒈ 碘-碘化钾(I2-KI)溶液 能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂。 , R, F/ \+ z4 K! N& g# r5 ?9 }
配方:碘化钾2g ; 蒸馏水300ml ; 碘1g
& N- W( D7 K8 y; f7 U先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳。
9 Z4 G- t$ n3 z# t( \, B⒉ 苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ) 能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂。
! d" R Q. l5 ^2 E. W, p配方:(1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ; 95%酒精10ml ; 过滤后再加入10ml甘油 , M( D3 r% z% `! ~1 T3 V, B3 \% C
(2)先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。 - H- p: f: W" n6 e& c. u
(3)苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。 5 i# L5 h, I& H& S$ w# e1 o7 ] o
⒊ 1%醋酸洋红(aceto carmine) 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
; V5 H; i/ Z7 d$ u5 V* i' @$ ^配方:洋红1g ; 45%醋酸100ml
2 g2 e) T! |* F煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矾溶液1~2滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用。 / B+ K2 q& j% Y8 H0 o+ g& [4 l) n% Z6 F6 O; o
⒋ 改良苯芬品红染色液(Carbol fuchsine) 核染色剂。
: O( |% h- F* b; |1 g7 o5 Z配制步骤: 先配成三种原液,再配成染色液。 4 ~% j1 K; [0 \4 [' o' a/ F
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中。 1 x! {* C; p% K: b% T/ _+ i
原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。 " w5 m8 W4 k; z! J: v5 w# {
原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛)。
! D6 c9 O5 @0 ^) R(原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用)
5 i# {* ~6 G) Q3 r染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~1.8g,配成10%~20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。 3 _* m, {( n4 a5 l. A* M8 Z
适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。 |
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