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实验室常用染色液配方
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5 E9 v$ I0 { C. o6 ?. ~! ^. f; F7 k7 c( O* S' O' M# k2 X
1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液
' S& Q! k- Y' y, t% g% MA液:美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精 毫升
& H# C( w1 o( {; QB液:氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水 100 毫升分别配制A液和B液,然后混合即成。) ^( k- _- q7 W" I
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
8 o5 U4 f W7 R/ P0 I9 @- Y% z I z6 [A液:碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精 10.O 毫升
! q& I! u8 ]% A& W# _% c WB液:石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水 95 毫升# t D/ ~* m, Y/ S
将碱性复红溶于95%酒精中,配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中,配成B液。将两者混合即成。7 B6 U+ d0 b7 L6 G( }+ o
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液:结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精 25.0 毫升! X! {. W! N8 }* q, p9 U4 J l# J
B液:草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水 100 毫升3 Y2 P, j u" d. X) i
将结晶紫研细后,加入95%酒精,使之溶解,配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水,配成B液。两液混合即成。
H- S" i w: P. E( y/ u& s( I4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘 1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水 300毫升
$ B7 Y# G8 b4 o# g0 L先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,溶时可稍加热,最后加足蒸馏水量。
4 c5 w) r: N" ~8 U. D# T5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克 蒸馏水 100毫升
9 O9 J: H% Y: ?4 w8 V' e% }' D: o/ P6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水 100毫升先将孔雀绿研细,加少许95%酒精溶解,再加蒸馏水。
4 r, Z9 c# A# n l' @7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水 100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟,加入福尔马林作为防腐剂,用玻璃棉过滤。( i1 h1 j& m" s0 y) l S5 U2 P
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水 100毫升
# e2 g) {/ P, ]: a& J9 d. M3 U9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水 95.0
, ^: M1 g7 G: F$ D% {10、乳酸石碳酸棉蓝染色液(真菌制片,短期保存)石炭酸 10.0克 甘油 20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升 棉蓝 0.02克蒸馏水 10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化,加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,溶解即成。
+ n u1 m- z& t' D$ ~: L k11动物组织石蜡切片染色方法/ J5 R+ X8 \5 `3 |" R
苏木精-伊红(HE)染色:二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min,依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min,蒸馏水洗;入苏木精染液10 min,盐酸酒精分色4 s,自来水洗10 min;依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min,入伊红染液染色10 min;入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明,中性树脂封片.
P w) L! b2 d* c9 l6 f% H
! w9 M% e0 h1 S5 e- S3 N, T% [7 q# V
一、常用染色液的配制
0 x! d8 h7 {4 }! T' a' O, p⒈ 碘-碘化钾(I2-KI)溶液 能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂。
6 U* j( I9 j3 K5 Z8 p配方:碘化钾2g ; 蒸馏水300ml ; 碘1g % m# g7 l6 U7 p4 O7 {
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳。
% S w2 G3 u: b, J, ~* Q⒉ 苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ) 能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂。 $ r3 b& b3 \% ~# _
配方:(1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ; 95%酒精10ml ; 过滤后再加入10ml甘油 . o5 L7 h3 H% a" k: h1 M, {& l% R
(2)先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。
8 U- [7 l% x( n- Y. c8 G# J" J: L(3)苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。
9 b- h1 e+ a# p+ \: N: D$ d⒊ 1%醋酸洋红(aceto carmine) 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
! ^, Y- c$ @* p) o1 u8 d配方:洋红1g ; 45%醋酸100ml
" ^1 k( O& H: H煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矾溶液1~2滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用。 7 @; g& C" `! {# e9 r8 `4 A( e* ?
⒋ 改良苯芬品红染色液(Carbol fuchsine) 核染色剂。
. Z3 s# i& d- B7 r9 u' b( @配制步骤: 先配成三种原液,再配成染色液。
9 Q9 I! O6 _( W, o# L, T原液A:3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中。
! F& M* l9 q6 k2 d$ N. g( V& y N0 X原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。 % @2 n9 P2 l6 g1 m3 @# o9 Y
原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛)。 % u' t: d+ Q9 c0 X; y* |" b% @( D
(原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用) 8 A' R& c% ?" e2 k4 M
染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~1.8g,配成10%~20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。
9 l* G# I0 r3 E适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。 |
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