小鼠骨髓间充质干细胞传代不佳，很着急！

feiyang

向大家请教。我养的小鼠骨髓间充质干细胞，传代后长的不好。我的过程是这样的，原代细胞长的很好，要等20天才能达到90％融合，这时传代，0.25％胰酶EDTA消化5分钟，细胞形态变圆，但是仍然有大量细胞贴在壁上，拍打也拍打不下来，这时我用细胞刮子刮剩下的细胞，再一起分瓶培养，但是这样传代后细胞长的不好。我不知道是哪里出了问题呢，是不是细胞刮子损伤细胞，但是不用刮子大部分细胞还贴在壁上啊，急死了！请大家帮帮我！

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回复 andyz0922 的帖子- r; ]5 t/ E8 e" r# }4 p

9 u% L+ T3 j7 r- @# x8 u# J  Z! |. D' q巨噬细胞是什么形态？

feiyang

有一种理论认为开始就用大的培养瓶。如果开始用25cm2的培养瓶，虽然细胞长的快，但是这里面有很多不是MSC的细胞也一起长起来，可能会对后期细胞的生长及纯化不利。大家是怎么认为的呢？谢谢！

呆呆鱼

开始时候用25cm2的，让细胞赶快长起来，然后换成50cm2或75cm2的传代分瓶

feiyang

25平方cm、50平方cm的，用哪一个比较合适呢？如果用25平方cm的，虽然达到融合会很快，但是细胞数量会少吧，是不是呢？

feiyang

非常感谢大家，我是新手，好多不懂呢！再请问大家，一只小鼠股骨、胫骨各2条，取出来的骨髓细胞，是放在25cm^2培养瓶中还是75cm^2瓶中养好呢？前者的话细胞密度大一点，是不是可以快点达到80－90％的融合，这样传代可以早一点，是这样吗？

彩云13_226

当然是25cm的，也可以用10cm的dish

feiyang

非常感谢大家，我是新手，好多不懂呢！再请问大家，一只小鼠股骨、胫骨各2条，取出来的骨髓细胞，是放在25cm^2培养瓶中还是75cm^2瓶中养好呢？前者的话细胞密度大一点，是不是可以快点达到80－90％的融合，这样传代可以早一点，是这样吗？

apengforever

可能你培养方法有问题，我养过大鼠的BMSC，小鼠的应该差不多，小鼠的MSC原代好像不用那么久吧，还有就是消化的时候，消化之前用PBS先洗一下，再加胰酶，不要直接加，PBS洗之后，再加胰酶应该一分钟之内就可以了，如果有些贴壁的可能已经不是MSC了，直接丢弃就行了。& m5 l* k: M4 y; ]9 j
供参考。

andyz0922

还有 你的细胞要养20天吗？　一般来说　细胞体外超过　一周就很难消化的: I8 F$ k( @! O5 O1 q9 o3 l  r
你下次接种时候种的密集一些　就可以避免了吧