羊膜上皮细胞原代培养

vet2008

羊膜上皮面的粘液是些啥东西啊，是不是会影响胰酶的作用，进而原代做的很糟糕？做了很久羊膜上皮细胞的原代，时好时坏，希望诸位给点意见。

sijicc

胰酶消化以后，粘糊糊的，你需要大倍数稀释，多次洗涤。摸索摸索条件吧

vet2008

回复 2# sijicc ' B5 q9 t; a) a" z0 Z
8 ^# J- t' C) x
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    好的，我试一试。你也养羊膜上皮细胞吗

sijicc

我们实验室每个部门在做不同的干细胞，可以相互学习！

gaorongbest

回复 vet2008 的帖子9 r% C+ z; e; U' ^7 \

6 @# _+ p4 S8 ^0 r) ~我也在做羊膜上皮细胞，那些粘液是绒毛膜和羊膜层分离的时候带的，在处理羊膜时，尽量将其和血丝之类的东西清理干净，否则影响细胞的消化，我们做的也是时好时坏，让人很头疼，咱们可以一起讨论一下。

清影

回复 gaorongbest 的帖子8 F! o4 i% s/ g

6 e; Z- P/ S+ p$ F  e" O( L嘻嘻,你们做的羊膜每100cm2细胞收率有多少哈？有没有比较好的羊膜的消毒方法？？帮忙哈，新手遇到很多问题，挠头……

gaorongbest

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. u! C9 N+ b- _1 h4 f
& B. w& y4 a2 B+ ^% Q1 ^$ K我们一般是按体积算的，不按面积计算；羊膜是在无菌间取得，用加双抗的PBS冲洗，没有消毒这一说法；细胞有时候挺多，有时候较少，有时候消化得到的细胞多，但是基本是漂浮或贴壁不伸展的，你们的呢，有什么心得不？

清影

回复 gaorongbest 的帖子6 G8 O# ]! M6 c" P

( c1 `4 Z; x1 `: C$ \! r* a嘻嘻，情况查不多，你们做多久了？？
3 o, w% H  j4 ]8 N- m6 O! F按体积算的话，每10ml你们的细胞收率是多少？用什么培养基哈，不贴壁？？

一转身的距离

看来大家遇到的问题差不多。个人觉得标本采集和羊膜消化前的清洗很重要，如果标本较干净，则后面的消化则会顺利很多。另外标本采集后尽快处理，消化后的细胞状态会越好。想问下大家一般都是采用什么酶进行消化啊？单纯用胰酶大家觉得效果怎么样呢？

清影

回复 一转身的距离 的帖子- u. t1 ?1 [2 |0 D

. s3 h4 A: n$ I" Z2 U你们用胰酶消化哈？多大浓度胰酶，胰酶消化会对细胞有一定损伤……
1 k$ m: V- g0 ]* p组织运输液用什么哈？？加双抗么？
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