羊膜上皮细胞原代培养

vet2008

羊膜上皮面的粘液是些啥东西啊，是不是会影响胰酶的作用，进而原代做的很糟糕？做了很久羊膜上皮细胞的原代，时好时坏，希望诸位给点意见。

sijicc

胰酶消化以后，粘糊糊的，你需要大倍数稀释，多次洗涤。摸索摸索条件吧

vet2008

回复 2# sijicc ' d4 M  H6 q% P; r, Z
7 r1 J6 j1 R8 s5 ^7 y+ M
3 i  @3 L2 p4 O& F5 n! |3 z
    好的，我试一试。你也养羊膜上皮细胞吗

sijicc

我们实验室每个部门在做不同的干细胞，可以相互学习！

gaorongbest

回复 vet2008 的帖子6 h, D7 I! K3 U( {1 y5 F1 w& e

6 U* H7 V6 M4 k; M8 u4 e. o+ D我也在做羊膜上皮细胞，那些粘液是绒毛膜和羊膜层分离的时候带的，在处理羊膜时，尽量将其和血丝之类的东西清理干净，否则影响细胞的消化，我们做的也是时好时坏，让人很头疼，咱们可以一起讨论一下。

清影

回复 gaorongbest 的帖子) b7 Q: }8 t4 H  t/ L1 p% U

; v8 b/ t0 D+ p/ L; r嘻嘻,你们做的羊膜每100cm2细胞收率有多少哈？有没有比较好的羊膜的消毒方法？？帮忙哈，新手遇到很多问题，挠头……

gaorongbest

回复 清影 的帖子$ V! \+ B' H( a! g" F; m* H) R
, |4 T4 d. g; V9 M: m2 Z: ]
我们一般是按体积算的，不按面积计算；羊膜是在无菌间取得，用加双抗的PBS冲洗，没有消毒这一说法；细胞有时候挺多，有时候较少，有时候消化得到的细胞多，但是基本是漂浮或贴壁不伸展的，你们的呢，有什么心得不？

清影

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! v& B  u; ^$ i; a9 Q6 O
4 I6 N# E( [4 @* J! W  w嘻嘻，情况查不多，你们做多久了？？
) G# u# l8 I; g7 [4 ?5 l按体积算的话，每10ml你们的细胞收率是多少？用什么培养基哈，不贴壁？？

一转身的距离

看来大家遇到的问题差不多。个人觉得标本采集和羊膜消化前的清洗很重要，如果标本较干净，则后面的消化则会顺利很多。另外标本采集后尽快处理，消化后的细胞状态会越好。想问下大家一般都是采用什么酶进行消化啊？单纯用胰酶大家觉得效果怎么样呢？

清影

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你们用胰酶消化哈？多大浓度胰酶，胰酶消化会对细胞有一定损伤……+ \' ?3 V' P. `6 P) s. N
组织运输液用什么哈？？加双抗么？2 ~& Q, m5 O0 t! ]" ]