你们好！干细胞培养基问题

GZ2010Yu

你们好！我正在开题。从师兄师姐处多了解到许多人用Invitrogen(Gibco)的培养基时常常会出现细胞死亡的情况。请问在哪里可以看到相关的干细胞培养基及试剂的选择和质量、价格比较？谢谢。对水（用于复溶培养基干粉）的质量有要求吗？只需要注射用水吗？其内毒素水平要求是多少？
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除了细胞死亡，如何判别其他细胞异常？细胞异常是说Interference with the rate of cell growth，Changes in cell morphology，Aberrations in chromosomes，Altered DNA, RNA, and protein synthesis，Induced cell transformation。前2个好判断，在养细胞的时候就可能可以察觉到了。但是后3个就不容易了。有什么assay或分析手段可以判断呢？需要和贵的Kit吗？谢谢。
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7 F3 r5 K! J7 T* d- z  y- ]) U3 u余轩

xiaodiao123

首先，用Invitrogen(Gibco)的培养基本身并没有任何问题，一般都是操作过程或者其他方面的原因，比如血清、生长因子等。
& }( W" Y7 }5 w; o- s    其次，如果你要配制培养基的话，必须得用三蒸水，也就是一级水，你所谓的注射用水应该是生理盐水吧，用它来配制培养基是不可以的。具体关于内毒素的水平，在培养的时候一般没有问题，我们曾经做过这方面的检测，而且培养基本身都应该是经过除热源和内毒素处理的，当然如果有条件的话，可以用除热源的超纯水。$ v5 h+ b! ~, }. o4 C
    再次，一般我们判断细胞的异常，一般都是看细胞的生长状态以及生长速度等，每一种细胞他的状态是不同的，凭这一点判断即可。当然一开始的时候你可以先做一下标志物的免疫组化等等。养过一段时间后你自然能看出细胞的形态好坏。

nculsa747

我们培养hESC，一直用的Gibco的培养基，没出过问题啊！干粉配制我没有用过，感觉应该很麻烦吧，还不如直接买成瓶配制好的。细胞状态可以根据克隆折光的均一性，生长快慢等方面来判断。我培养hESC用的培养基是knockout DMEM, KSR,Glutamax,p/s,NEAA,2-mercaptoethanol.供楼主参考。

jhu132llh

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) f0 I0 T, W' t% m6 h1 m1.GIBCO的DMEM/F12是没问题的
9 R' d2 \1 U6 v9 S+ K2.你直接买液体的，就不要考虑水的问题了，他们的水特别好的，你直接用就行了。( K; u7 Z* T) u/ I$ a
3.你要是买的干粉自己配的话，需要是18.2兆欧的超纯水，我们实验室一直用这个陪干粉培养基，一点问题也没有。在4度保存可以使用很长时间，有的甚至超过了半年后使用都没有任何问题的。, j: u" {- Z) ?0 y. r# c
4.注射用水时生理盐水，是不能用来配培养基的，它会引起培养液离子浓度不对引发渗透压不对，对细胞不好。
: s7 M0 C, M) J% w( Q! c5.对细胞生长状态的判断，很简单，看细胞形态就知道，特别漂亮形态的细胞生长状态肯定很好。要是细胞出现畸形，还有出现空泡和细胞上出现异常大黑点就是细胞生长状态不好。$ A% r( G: ?" u4 ~/ H$ N
5.我们培养ESC用的培养基是knockout DMEM，挺好用的，至少我的细胞没问题。

清影

我们配制培养基用的是Millepore的Milli-Q的超纯水，一直这么使用，没发现问题。我们对内毒素控制是凝胶法水＜0.125EU/ML,培养基＜3EU/ML（Gibco的一般都可以达到＜0.5EU/ML）

deron

回复 jhu132llh 的帖子# h6 n! T5 x4 ~# ^, I- W  z/ T

3 f+ g( Z' \7 a; |是18.2兆欧，请海洋帮忙改一下吧

jhu132llh

是的
1 N4 C0 g( j1 u是18.2兆欧而非18.2欧& T( o: S$ R) h# ?
斑竹给修改一下吧- ]  y  j% d' f+ ^) v5 C6 M1 O8 D, U1 j
谢谢

细胞海洋

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1 m3 ?% M# o& F. Y5 \  w: J- U
6 A. ^, ]) @. R. F已经修改

307-ivy

恩,回答问题很积极也很专业,以后有福了,我做肝和胰干细胞的,多多指教

jhu132llh

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: Y, c: \9 b" l: R, K( E  X* F' L3 n- ?9 e
谢谢斑竹大大