人骨髓如何保存

athena1988620

我是新手，要用人骨髓间充质干细胞做实验，害怕原代培养失败，想把病人的骨髓留一部分保存备用，谁知到应该怎么保存，需要什么条件，保存时间有多少，前提是复苏后不能破坏干细胞活性 ，谢谢！

woaiIPS

本研究的目的是分离纯化、大量扩增人骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)。在细胞原位冻存后通过鉴定其生物学特性有无变化 ,以探讨这种原位冻存方法的可行性。采用常规方法体外分离培养并扩增骨髓MSC ,将培养扩增的细胞用含 10 %二甲亚砜、3 0 %胎牛血清、DMEM LG的细胞冻存体系 ,以不同的细胞贴壁密度在细胞培养瓶内原位冻存于 -70℃冰箱内。冻存后第 4,8和 12周在 3 8℃至 40℃的水浴中复苏冻存的贴壁细胞 ,通过细胞周期分析并检测其多向分化功能以鉴定该方法的可行性。结果表明 ,MSC不经消化 ,直接在培养瓶内原位冻存于 -70℃低温冰箱 ,3个月内细胞生物学特性没有明显改变 ,细胞仍具有向成骨、脂肪和成软骨细胞多向分化的能力。结论 :体外培养的骨髓MSC原位贴壁冻存于 -70℃ ,至少在 12周内不影响其生物学功能 ,此种短期冷冻保存是一种可行的方法

woaiIPS

上面是MSC保存( k  U" _( ?" B; \7 u- ^, A
骨髓也应该是低温保存吧 。如果不确定 参考下相关文献 关于材料， 组织低温保存的问题

2006goodluck

可以在细胞最好的状态时冻存几支。我通常用90%的胎牛血清，加10%DMSO。看似很浪费，其实对细胞的存活非常有帮助。
. B/ v5 \; Y& k+ W/ _' b: X0 Y1 先用胰酶消化细胞，然后离心! |& l4 L- c5 |0 l' e
2 用上述冻存液重悬细胞  l8 \- Z! D- t" j9 p' C; H
3 按照4度30分钟，-20度30分钟，-70度过度，次日液氮保存的方法

athena1988620

回复 2# woaiIPS
* |7 W& f. y) `; e. K1 Y* @! k. _谢谢啦~

athena1988620

回复 4# 2006goodluck
8 |" L# j4 u. {$ b' M你冻得是第几代的细胞？

woaiIPS

这个根据你个人需要 和习惯
! t2 `2 S1 _1 ?7 w6 X, B( v
1 x: t9 ?$ a9 h. }6 m1 Q) d5 f8 D我们有的同学 每传一代就冻存一次 ，这个看你以后的需要 ，如果第一次实验最后多冻存 然后自己整理一些不同代数的状况 利于以后实验 如果是细胞培养很成熟的细胞系 保存原代就可以