神经干细胞的传代吹打是否吹达成单个细胞

xiaodiao123

大家在培养悬浮生长的神经干细胞的时，尤其是在其形成神经球的时候，究竟是要吹达成单个细胞，还是只是把球稍微吹打一下，只变小就可。现在我们实验室有争论，说在传代时吹达成单个细胞，细胞特别容易分化。我现在也搞不清楚了，希望大家给指点一下，如果有相关的文献的话，那在这里先谢谢了！

xuanxuan69

要连续培养的话最好不要吹成单细胞，如果只是取前几代细胞做做试验就没关系了~

cyumin123

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5 w, J4 h( Y' ]. x' g% [没测呢，我们的实验对后续影响不大的。提高比例的话只能传代了，传个二~三次就差不多了吧！

xiaodiao123

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原代测的话可能杂细胞比较多吧，你没有用血清让细胞贴壁，然后再收集测细胞的比例吗？

平平淡淡

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- ~+ a  F' H. g! a我也打算直接用原代做实验了，所以拿原代细胞上了两次流式看看神经干比例是多少，可结果都是20%左右。请问你们测了细胞比例吗？是多少？

esc123esc

如果是做培养的话最好不要吹成单细胞，消化也要尽快，到3,4个细胞的小集落比较好，单细胞容易分化~

momocha1985027

请问高手，我的干细胞在0.125的胰酶消化2分钟后吹打，用的是巴氏管，仍然只能吹打成较小的团块，并且诱导了5天都没贴壁，且细胞状态也不好了，不如之前的细胞那么圆润，看着干巴巴的，请高手指点下，这是怎么回事啊？

cyumin123

我们在做的过程中有吹成单个细胞，继续培养有形成球，但是后来又不行了，就一直是单个，不形成球了，吹成单个的话个人认为吹打力度很难控制的，胰蛋白酶消化要加血清终止，又怕分化，所以徘徊着呢~~~

cyumin123

回复 xfyang2007123 的帖子+ t1 [& w& p& s  n. G, s

, L  i' i2 B! E. ^- R7 H我们是一直用的原代细胞做实验的，传代方法一直没建立好。这样感觉细胞很浪费，做一批实验就得做一次原代，很郁闷呢~~~

平平淡淡

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- A! B8 }1 U# q. [$ _) g
- M* w' P% b# I! `+ L- i我也养了好几个月的神经干了，也是机械法传代，但传代后细胞就长不起来。老是原代培养，很郁闷！！！