【求助】请养内皮祖细胞的朋友进来看看，我养的EPCs怎么是这样的形态呢？

chinajinlei

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! c8 v) x" T& j& w$ l来源：兔外周血+ h6 ]7 T2 u+ M* L% m' N' [$ D
单个核细胞的分离：1.096的兔淋巴细胞分离液密度梯度离心
- X- K6 ~2 b# Q& y$ q0 tEPCs的培养：48 h后, 洗去未贴壁的细胞, 将贴壁的细胞继续培养# N1 k, e( N7 \( S; @4 `- s) m  p
培养液：Cambrex公司的EGM-2培养基
, U' g; U2 [3 i& w) c3 O1 c
' q9 z! `& [/ r; ]5 H% l8 k1 w$ @! E问题：
& v# G4 H& @) Z2 h(1)文献中报道的内皮祖细胞多为梭形或是铺路石状，而小弟养的怎么是如下的条带状状呢，不知道朋友们是否遇到过类似的情况。请指教？2 W  K2 t( S& n' M/ z# K: t
(2)打算从兔外周血培养晚期EPCs(即"late" EPCs 或outgrowth EC)，正确的培养方法应该是什么时候首次换培养液呢？: m7 ^8 x- h3 n* F3 B" ^. Q2 y1 k7 P
非常感谢您参与讨论。4 w  A" a: M5 }* e, r4 S/ K

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我爱光明2009

考虑EGM-2培养基里含的生长因子刺激过度。

zoe

能否上清晰点的图？您的图细胞形态不太清晰。
  \4 g1 R  F7 a3 ]% q我也在养这个EPCs，但是大鼠骨髓来源的，也在苦恼该用哪种方法。

benben

我一般3-4天首次换液，兔的没有养过，大鼠的一般七天左右呈针样或内皮样。

zoe

请问如何提高EPCs的纯度？通过传代可以吗？

chinajinlei

曾在帖子中看过有朋友这么做“先在倒置显微镜下寻找一个比较好的EPC克隆，周围杂细胞较少的，纯度较高的，用1ml枪头将此克隆上划下来，将枪头蘸上的细胞重新接种培养。”
! G! k  q: T7 W4 w& G欢迎高手继续参与讨论

zoe

能具体说下如何将克隆划下来吗？

zoe

如果用外周血培养，是不是可以得到相对纯些的细胞？我在培养过程中发现骨髓里含有太多成纤维细胞了，其长势很快就盖过EPCs。

chinajinlei

chinajinlei 发表于 2010-12-15 11:48
9 j: ?* k7 Z: t! p曾在帖子中看过有朋友这么做“先在倒置显微镜下寻找一个比较好的EPC克隆，周围杂细胞较少的，纯度较高的，用 ...

) p# g4 M$ I6 U' w  F6 ?8 R我仅做过从外周血里面培养内皮祖细胞，骨髓里面内皮祖细胞的含量应该比外周血多一些。
, p- ~: h7 R& e0 Z# a: c这是在别的论坛上看到的方法，我还没有试过：“在倒置显微镜下，用小枪头挑选较好的克隆，将其单独挑下来，轻轻吹打，接种继续培养。” 请做过细胞提纯的朋友多多指教
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zoe

用枪头吸下来后还需要用消化液消化打散吗？