【求助】请养内皮祖细胞的朋友进来看看，我养的EPCs怎么是这样的形态呢？

chinajinlei

0 B. z8 l# w) Q
) c6 a8 ]' J/ D7 G
来源：兔外周血; o! ]6 _0 {) M& K; q! g
单个核细胞的分离：1.096的兔淋巴细胞分离液密度梯度离心
  v* N( Z% |3 B$ fEPCs的培养：48 h后, 洗去未贴壁的细胞, 将贴壁的细胞继续培养
, q7 Y* a& D- n6 c+ R% i6 ]/ w培养液：Cambrex公司的EGM-2培养基
  h; o* W5 Y% |6 }! W
% L$ k& A& ?3 D问题：
  ]0 t" j& o& X/ E7 C& @(1)文献中报道的内皮祖细胞多为梭形或是铺路石状，而小弟养的怎么是如下的条带状状呢，不知道朋友们是否遇到过类似的情况。请指教？
+ I- D* [7 G! v# f  a(2)打算从兔外周血培养晚期EPCs(即"late" EPCs 或outgrowth EC)，正确的培养方法应该是什么时候首次换培养液呢？# d% T$ f5 L1 L+ j- ?
非常感谢您参与讨论。
1 O* K  r  D0 n! U
; j- z& m9 S$ g/ q- j1 g

我爱光明2009

考虑EGM-2培养基里含的生长因子刺激过度。

zoe

能否上清晰点的图？您的图细胞形态不太清晰。
* T" M3 j% y! w# C4 H/ m: p我也在养这个EPCs，但是大鼠骨髓来源的，也在苦恼该用哪种方法。

benben

我一般3-4天首次换液，兔的没有养过，大鼠的一般七天左右呈针样或内皮样。

zoe

请问如何提高EPCs的纯度？通过传代可以吗？

chinajinlei

曾在帖子中看过有朋友这么做“先在倒置显微镜下寻找一个比较好的EPC克隆，周围杂细胞较少的，纯度较高的，用1ml枪头将此克隆上划下来，将枪头蘸上的细胞重新接种培养。”
* X0 _5 Q1 {) f' `# _3 u. ^欢迎高手继续参与讨论

zoe

能具体说下如何将克隆划下来吗？

zoe

如果用外周血培养，是不是可以得到相对纯些的细胞？我在培养过程中发现骨髓里含有太多成纤维细胞了，其长势很快就盖过EPCs。

chinajinlei

chinajinlei 发表于 2010-12-15 11:48 / G. x1 j; Q$ w# J4 o! I
曾在帖子中看过有朋友这么做“先在倒置显微镜下寻找一个比较好的EPC克隆，周围杂细胞较少的，纯度较高的，用 ...

3 K1 J& d3 G3 I# y! U
我仅做过从外周血里面培养内皮祖细胞，骨髓里面内皮祖细胞的含量应该比外周血多一些。
1 S3 y6 K) ]9 h" m4 N这是在别的论坛上看到的方法，我还没有试过：“在倒置显微镜下，用小枪头挑选较好的克隆，将其单独挑下来，轻轻吹打，接种继续培养。” 请做过细胞提纯的朋友多多指教
; O  }; X! d% H7 |0 Q3 i, r% H+ z' b       

zoe

用枪头吸下来后还需要用消化液消化打散吗？