【求助】请养内皮祖细胞的朋友进来看看，我养的EPCs怎么是这样的形态呢？

chinajinlei

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" k& }8 n( |+ b, |6 k$ \来源：兔外周血
5 @4 [, @( ?2 Y, y) w/ H3 N. P单个核细胞的分离：1.096的兔淋巴细胞分离液密度梯度离心5 K; X! q, r! i. y. J
EPCs的培养：48 h后, 洗去未贴壁的细胞, 将贴壁的细胞继续培养1 v' s5 F& [$ z1 P  _5 K; ?
培养液：Cambrex公司的EGM-2培养基
1 d/ g$ i7 P# R1 n  @- c
; N* l4 u/ L3 v" @9 s5 z问题：
- l& `2 x- q5 x2 L8 [8 F7 e(1)文献中报道的内皮祖细胞多为梭形或是铺路石状，而小弟养的怎么是如下的条带状状呢，不知道朋友们是否遇到过类似的情况。请指教？
* y; i5 G# w7 W% i(2)打算从兔外周血培养晚期EPCs(即"late" EPCs 或outgrowth EC)，正确的培养方法应该是什么时候首次换培养液呢？! B8 T5 s/ {; W8 _# E. y, \
非常感谢您参与讨论。/ a4 b2 e" [" U$ t7 v
" t& d/ _; A9 i/ `( o: q

我爱光明2009

考虑EGM-2培养基里含的生长因子刺激过度。

zoe

能否上清晰点的图？您的图细胞形态不太清晰。! J+ e+ f3 M- N, U2 {" }
我也在养这个EPCs，但是大鼠骨髓来源的，也在苦恼该用哪种方法。

benben

我一般3-4天首次换液，兔的没有养过，大鼠的一般七天左右呈针样或内皮样。

zoe

请问如何提高EPCs的纯度？通过传代可以吗？

chinajinlei

曾在帖子中看过有朋友这么做“先在倒置显微镜下寻找一个比较好的EPC克隆，周围杂细胞较少的，纯度较高的，用1ml枪头将此克隆上划下来，将枪头蘸上的细胞重新接种培养。”0 T) k3 J$ O9 y
欢迎高手继续参与讨论

zoe

能具体说下如何将克隆划下来吗？

zoe

如果用外周血培养，是不是可以得到相对纯些的细胞？我在培养过程中发现骨髓里含有太多成纤维细胞了，其长势很快就盖过EPCs。

chinajinlei

chinajinlei 发表于 2010-12-15 11:48 ) B/ R1 w( u9 B5 t+ n) ?" [
曾在帖子中看过有朋友这么做“先在倒置显微镜下寻找一个比较好的EPC克隆，周围杂细胞较少的，纯度较高的，用 ...

' f5 d9 W9 ?) H- A. f1 c. K
我仅做过从外周血里面培养内皮祖细胞，骨髓里面内皮祖细胞的含量应该比外周血多一些。
- a7 _. V. Y7 l6 m: Y4 E6 h这是在别的论坛上看到的方法，我还没有试过：“在倒置显微镜下，用小枪头挑选较好的克隆，将其单独挑下来，轻轻吹打，接种继续培养。” 请做过细胞提纯的朋友多多指教* n  X4 w1 `3 D  Q; c, n" u
       

zoe

用枪头吸下来后还需要用消化液消化打散吗？