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楼主,想做科研的话就做点牺牲吧,抽自己的骨髓,(我们都被抽过,一点问题没有)
8 T, O9 c/ |6 [1、无菌抽取人的骨髓20毫升,8 X- c5 a" G4 x' F+ r w
2、离心2000转*10min,取上清放入无菌培养瓶* w( T& Y9 W, E( Y* x3 w
3、剩余红细胞加pbs或0.9%NS按1:3比例混匀,再离心2000转*10min,或习惯用淋巴细胞分离液分离的话,也可将红细胞与pbs混匀后加入淋巴细胞分离液中,(比例是分离液3ml:悬液7ml)沿试管壁慢慢加入3ml淋巴细胞分离液之表面,勿与分离液混合。然后2000r/min水平离心15min,管内分4层,自上而下依次为血浆、单个核细胞(位于细胞分离液上界与血浆下界的中间呈白色雾状层)、颗粒白细胞(位于淋巴细胞分离液下界与底层红细胞上界的交界处)和红细胞(位于管底)。
0 [+ s( J* j& T! \. i5 Y4、吸除上清后轻轻将白细胞层吸除放入无菌培养瓶中,加入自体血浆和培养基DMFM/F12混匀$ q7 P' Y* n4 N) K4 D
5、 放置37°二氧化碳培养箱内培养5天。 ' H& S" H; a( |6 v2 @% A- y
我们实验室是这么培养的,不知道对你有没有帮助,请多指导% K2 y* C4 ]+ w8 G3 B' @: H& n
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