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楼主,想做科研的话就做点牺牲吧,抽自己的骨髓,(我们都被抽过,一点问题没有)% v0 Z2 m' A$ K6 o# M$ R/ B
1、无菌抽取人的骨髓20毫升,; \" Y, P" |* T- U$ f
2、离心2000转*10min,取上清放入无菌培养瓶
2 a5 }7 z. P/ { a. m; X0 P3 W3、剩余红细胞加pbs或0.9%NS按1:3比例混匀,再离心2000转*10min,或习惯用淋巴细胞分离液分离的话,也可将红细胞与pbs混匀后加入淋巴细胞分离液中,(比例是分离液3ml:悬液7ml)沿试管壁慢慢加入3ml淋巴细胞分离液之表面,勿与分离液混合。然后2000r/min水平离心15min,管内分4层,自上而下依次为血浆、单个核细胞(位于细胞分离液上界与血浆下界的中间呈白色雾状层)、颗粒白细胞(位于淋巴细胞分离液下界与底层红细胞上界的交界处)和红细胞(位于管底)。
1 O5 F1 M1 C0 x0 H# u& A9 y" v1 J4、吸除上清后轻轻将白细胞层吸除放入无菌培养瓶中,加入自体血浆和培养基DMFM/F12混匀
3 e8 M& v9 b2 D5、 放置37°二氧化碳培养箱内培养5天。
+ C, o: ~1 E6 V& z. X* x2 j; u+ _$ S 我们实验室是这么培养的,不知道对你有没有帮助,请多指导3 U0 y6 f# x% B
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