原代细胞培养条件对细胞的影响 ，难以捉摸

gaorongbest

最近我们对原代细胞培养条件进行摸索，原以为胰酶和PBS有问题，因为 PBS是买的那种粉剂直接溶解的那种 ，所以一直不知道里面含有钙钾离子，最近有人做实验才知道里面有 钙钾离子，所以以为这影响了消化效果，所以原代做的不好，但是周三做的那批却长的挺好 （用的是含钙镁离子的PBS及胰酶 ），所以现在很纳闷，到底是什么因素影响的原代啊？请大家帮帮忙，看看到底是什么问题！

daviehe

回复 gaorongbest 的帖子/ [( X' p; j; J+ t2 M  W& h( U

$ b% ^6 w& k7 e0 g2 {# F7 N那你用进口的FBS 试试 GIBOCO的不错

daviddow

不是污染不污染的问题。问题是干细胞培养需要独特的培养基，那些培养基专门培养干细胞。

痞子的烟头

回复 gaorongbest 的帖子, e2 l; u9 o: Z4 `' s, Q; h

" g! M0 J) `% \0 @5 a+ ]( |伸展不好，可能跟你原始消化有关，时间控制好，加胰酶时用枪吹打，三十七度消化，再吹，血清浓度用百分二十的，注意操作应该不会有问题的；

gaorongbest

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' v# l4 P& F; n$ P! {: J" a
; J8 r9 n) p, }" G$ o$ C: O培养基是买的那种袋装的，然后自己溶解后调pH=7.2过滤后用，应该没什么问题啊，这个怎么影响原代培养呢？你能解释一下吗？谢谢啦！

gaorongbest

回复 daviehe 的帖子. n5 U6 J8 u: q: ?
0 R- h+ y3 p. C- n% `/ z; D
不是不用，而是买的那种包装的PBS 没标注无钙镁离子，最后才发现这个问题的，原来一直以为养细胞用，不会购买含钙镁离子的呢。

gaorongbest

回复 痞子的烟头 的帖子5 y) b5 C* `" V9 w: W- A! u
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我们很多次都是细胞贴壁不伸展，不知道是不是消化时间过了，血清不知道有没有问题，一直用的是四季青的。你能不能给我分析一下不伸展的原因呢？这个让我感到很困扰，谢谢啦。

luomx07

不太懂，不过还是顶下

daviehe

为什么不用无钙镁的PBS呢

daviddow

消化不会影响元代培养。主要是培养基影响元代培养。