microRNA的实验问题

mckf111

我是个刚入门的研究生 方向是miR-200c和EMT的研究 想向各位请教一些实验问题 还望不吝赐教
, M- \5 O& `- k. @, E  g我想研究200c的上调和下调对细胞运动的影响 但我还不完全清楚有哪些实验方法能够做到这些 我目前知道的是上调可以用mimics 下调可以用拮抗剂 但这些让公司合成好像蛮贵 而且转染细胞好像是瞬时的 不知道大家有没有好的建议 可以用构建质粒的方法 既能节省财力 又能稳转呢？谢谢（好像看到文献上有用pre-miRNA上调和LNA下调，不知道具体的方法是怎么样的，真希望有个protocol啊。。。）
8 T9 [- ~: t: {1 b! D0 C谢谢！

mckf111

杯具

华侃天下

顶dddddd

siyue13

帮顶，楼下解答

runsong

miRNA的稳定上调可以慢病毒，可稳转，持续表达miRNA。但慢病毒的包装是门学问，实验室没有基础的话还是挺难的。7 Y9 O+ J' {' j3 Z
一些普通的质粒（如pEGFP-C1）可以经改造而表达miRNA，可参考我与 深海寂寞鱼 讨论的帖子 :http://www.stemcell8.cn/thread-32898-1-1.html' A4 ~7 q% F* E* J# O# @
也有商品化的专门表达miRNA的质粒。可见附件。
0 c; |5 A- T$ c: A" Y' o7 c7 @% S6 I
miRNA的稳定下调可以参考这个帖子： http://www.ebiotrade.com/newsf/2010-2/2010224172205758.htm  与   http://www.ebiotrade.com/newsf/2010-2/2010223153031723.htm: z1 t5 F# o8 m- L7 t
这里面主要是两种方法：1、miRNA海绵（见附件）5 Y+ L9 A! ]0 k1 q7 [
                                       2、miArrest （http://www.fulengen.com/product/mirna/inhibitor/）' k3 A( p; l/ V

5 P9 c  Z& x0 ]. z
. r* }6 e6 j( `" X0 s' w/ T7 d% G+ q4 q3 W

3 c, G4 r9 v3 s' G

runsong

商品化表达载体

tjbone

好好学习天天向上

snokey

/ R4 M! K2 k/ S0 _, H% Q8 \. K7 L' R
7 q5 _! P1 z; s建议楼主看看有没有别人发过的文章里有你要的载体.有的话,就可以直接发邮件去要.我写过不少邮件去要,一般一半都可以要到.