microRNA的实验问题

mckf111

我是个刚入门的研究生 方向是miR-200c和EMT的研究 想向各位请教一些实验问题 还望不吝赐教$ f* r& Z3 v; a% R
我想研究200c的上调和下调对细胞运动的影响 但我还不完全清楚有哪些实验方法能够做到这些 我目前知道的是上调可以用mimics 下调可以用拮抗剂 但这些让公司合成好像蛮贵 而且转染细胞好像是瞬时的 不知道大家有没有好的建议 可以用构建质粒的方法 既能节省财力 又能稳转呢？谢谢（好像看到文献上有用pre-miRNA上调和LNA下调，不知道具体的方法是怎么样的，真希望有个protocol啊。。。）
2 y# y. w6 t4 X0 {4 ]; H6 n谢谢！

mckf111

杯具

华侃天下

顶dddddd

siyue13

帮顶，楼下解答

runsong

miRNA的稳定上调可以慢病毒，可稳转，持续表达miRNA。但慢病毒的包装是门学问，实验室没有基础的话还是挺难的。
1 q  ^$ T/ t, P" A3 @: I; A一些普通的质粒（如pEGFP-C1）可以经改造而表达miRNA，可参考我与 深海寂寞鱼 讨论的帖子 :http://www.stemcell8.cn/thread-32898-1-1.html3 A- i' Y1 W4 _  E* F0 |9 F/ A
也有商品化的专门表达miRNA的质粒。可见附件。# O1 h+ l+ d) r& i
; \  p& X( `, \
miRNA的稳定下调可以参考这个帖子： http://www.ebiotrade.com/newsf/2010-2/2010224172205758.htm  与   http://www.ebiotrade.com/newsf/2010-2/2010223153031723.htm' E, y( i* j- a/ g5 a
这里面主要是两种方法：1、miRNA海绵（见附件）
# y4 N  }! ~. n                                       2、miArrest （http://www.fulengen.com/product/mirna/inhibitor/）
) e+ }8 B5 F! u) d6 P$ ^2 c5 I. Q6 L0 n

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% b/ N" S$ B5 G+ [. p5 j

runsong

商品化表达载体

tjbone

好好学习天天向上

snokey

! [1 ]- x4 Q6 l& m. ?
* M4 P: \2 _$ _0 }% j( |7 y  }* \
建议楼主看看有没有别人发过的文章里有你要的载体.有的话,就可以直接发邮件去要.我写过不少邮件去要,一般一半都可以要到.