求高手解答该原代细胞是怎么了

静水流深

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原代分离之后细胞也贴壁但是细胞层和其上层均有附着的小黑点 而且这些小黑点也会越来越多 但不影响细胞的生长 怀疑细胞已经污染了 望高手解答

细胞海洋

建议上图

luoziwei

小黑点呀，我遇到过，但我坚决的扔了

luoziwei

不管它是不是污染，总之染色检测的图片都不好。没办法呀，忍痛扔吧

gaorongbest

我们做原代也有小黑点，但是师姐说是细胞碎片，传代后就没有了，以前看别人说黑雕虫，但是我觉得不会那么轻易污染吧。

BIOLOGY

一般情况下这些事正常的，因为有一些碎片在里面，传代以后基本就没有了，我以前遇到过这种情况，直接扔掉了饿，后来看别人做也是那样，传过就没有了

bin

没有照片很难判断。可能是一种黑虫感染。不放心就扔了吧。

bin

可以看看下面的细胞培养中的常见污染问题( ?6 z; ?( s& ]& b) h7 D

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细胞培养中的污染问题; Q8 u! x- V; t. n* G* D; S8 G& i
常见的污染如下：8 ^( y. \3 }# O9 E7 a( N2 V1 C6 T
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。1 ]6 ^. N3 A8 s1 N( ?
        仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！! E0 A8 b- l5 L
        可在培养液中加相应的抗生素处理
& m/ l9 i) l# J3 H2 t2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
/ X7 I5 \0 @2 S) T% y1 {6 T/ a        CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。; N7 y9 y% v7 g6 p! X# g/ Y
        其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。. m9 U: H7 p& U' `9 C. j6 Y
        预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作。 , D9 S- V7 [8 u1 f  c
3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。. _. b% Y: \/ P5 _" V9 k8 O0 H
        用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。1 L7 k! ?. y% u. O) w! h
4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。
9 ~/ l: x" \& E. X5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。& n' N5 J* E. w
6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞占优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。1 g4 e3 D5 s0 U; \. j
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等。* L2 Z4 M( e# k/ A  `; H
        关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。6 n8 g9 t! p( ^) I! f2 N5 z
也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。/ r1 g2 P( }8 I; u5 ], `8 E, m0 D
1、孵箱应定期用三氧机消毒或者紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭拭擦孵箱同时，孵箱内的水应是三蒸水。' j4 ?# _" [8 }2 e! l8 ^4 v* n4 X1 u
2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素。% \" b9 ?1 i! \" U8 Z
3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染。
$ b0 O' y. ~- W4 a" Q. @" E- h4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。& S# g  G5 J0 \0 E- e+ k
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1 n) `/ ^0 R9 h4 V9 O7 }, }8 E本文来源于：生物问问博客,原文地址：http://www.bioask.cn/html/199.html

starlancer

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* _" @  w0 }0 Y+ `$ D7 o黑点有多大？会不会动？最好是上图。不影响细胞生长是什么概念？多长时间内不影响细胞生长？长时间培养后会出现什么状况。你培养液中加抗生素了么？我猜测很可能是污染。

静水流深

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9 N: I& [! k  y+ I. t# @2 V: h- n小黑点不大 但是越长越大 越长越多 最后成杆状的了 图片没有上传成功 " B6 {) K% n7 P+ |# H$ a8 j- d3 k
细胞生长良好 就是小黑点越来越多了
3 z& h! n8 N3 P! d& q培养液中加入1%的双抗 貌似是污染了 但不确定是什么污染 以前也没有出现这种情况