脐带干细胞如何分离

sydfxt

各位高手,我最近开始的取脐带干细胞,我的方法是:$ b' V# X. k& |/ J7 g
1.将脐带中的血管挑除' N* U: x+ y3 h0 Y5 o
2.用眼科剪剪成碎片
; G7 b$ Y: D+ S& o1 K, n$ {3.放在10倍左右体积的0.1%的2型胶原酶中37度消化半小时(震荡),我没用胰酶,因为感觉胰酶对细胞的损伤大
5 v& H" g2 Q# u5 v; s' ?4.稀释3倍后1600rps离心10min7 M2 d5 k* Z& [4 t
5.冲洗后再次1500rps离心8min
! C$ ]' q4 }4 @6.然后过筛网,此时感觉液体仍然很粘稠...直接放培养瓶中培养  H# V5 ]( \% e) V9 X4 H- ^" ?
' T9 r8 ^* i* g+ L  Z2 q3 A; e
操作完后直接镜下观察结果发现没有细胞,这是怎么回事?我哪个环节出了问题,谢谢指点
( r* C  ?1 F8 |' a* U5 o; V

sydfxt

各位高手,我最近开始的取脐带干细胞,我的方法是:
3 n8 v7 W; p, l8 L& |/ m1.将脐带中的血管挑除. N1 |4 r+ _: I. |- [, D
2.用眼科剪剪成碎片
2 F# c3 V  B! l+ |8 \, }3.放在10倍左右体积的0.1%的2型胶原酶中37度消化半小时(震荡),我没用胰酶,因为感觉胰酶对细胞的损伤大
6 P! M3 l0 P3 S; }$ Z+ T5 @4.稀释3倍后1600rps离心10min. A7 I3 |$ L" k5 F
5.冲洗后再次1500rps离心8min6 D# |+ z8 w1 c  u8 N$ v
6.然后过筛网,此时感觉液体仍然很粘稠...直接放培养瓶中培养# q4 U2 y' [( c
4 r& Q: ?2 w2 P/ P8 z" V8 N0 U4 i
操作完后直接镜下观察结果发现没有细胞,这是怎么回事?我哪个环节出了问题,谢谢指点 . P7 B; ^2 |( \( _1 z

henryjia

液体仍然很粘稠,此时过筛网肯定损失绝大部分细胞。
- I. A9 z) M6 h: ?
0 J. m! k! i2 q  G我也遇到同样问题，稀释5倍左右冲洗后，把仍然较粘稠的培养液种植，后来发现有一瓶生长良好。另外2平很差。 正在尝试不同方法消化。
% |# c$ t- h" X1 z
8 [( E% ^/ m: o; w2 [. S: z8 t5 }6 ~- p相信这是一个非常普遍的问题，斑竹是否可以给专题讨论，期待干细胞的分离？提前谢了。

vae有何不可

附一篇用酶进行消化和分离培养脐带干细胞的文章。

西瓜太郎

是不是你用胶原酶时间不够啊？一般单用胶原酶的都是消化过夜，还有就是你半小时后的消化液里含组织块的多么?有的时候要看消化的效果不是一味的追求时间，个人感觉是时间不够，细胞数消化下来的少结果当然就没了，胶原酶对细胞伤害小，可以消化时间长点。个人的一点意见   -- --
( m( i: e7 M# T) v

sydfxt

回复 西瓜太郎 的帖子6 {( ?% u/ Y+ Q4 t6 }" T! k
9 l  Z4 V  ~# {' I4 o8 r1 d
我觉得消化的还可以,组织块基本都消化没了,当然,为了减少消化液的量,下次决定加点胰酶进去

chb611301

我的方法是，用I型胶原酶消化过夜，再用胰酶消化5-10MIN ,然后用大量的生理盐水去洗涤 一般都用到500ml 以上去洗细胞，这样就不会太粘稠！离心收集后再用大体积重悬，此时再过筛，我自己做的时候觉得这样不会损失多少细胞！自己的一点体会啊