脐带干细胞如何分离

sydfxt

各位高手,我最近开始的取脐带干细胞,我的方法是:% D- }$ E, `2 y3 {# \) f7 Q
1.将脐带中的血管挑除
9 R6 o. `* B$ G2.用眼科剪剪成碎片: u1 z! a$ S' w: ~3 }
3.放在10倍左右体积的0.1%的2型胶原酶中37度消化半小时(震荡),我没用胰酶,因为感觉胰酶对细胞的损伤大/ p' n) Y& y- Y8 v2 L* O8 n
4.稀释3倍后1600rps离心10min- c3 y; E" T! @, c- o- ]
5.冲洗后再次1500rps离心8min
8 N% N: i1 I% g: N3 l1 _1 h+ R1 y6.然后过筛网,此时感觉液体仍然很粘稠...直接放培养瓶中培养
$ |6 d" @2 \5 C1 B0 C# m6 S0 [& o) y& O" K3 X) Y: m
操作完后直接镜下观察结果发现没有细胞,这是怎么回事?我哪个环节出了问题,谢谢指点
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sydfxt

各位高手,我最近开始的取脐带干细胞,我的方法是:
/ A; t6 ~8 S9 E! I; ^1.将脐带中的血管挑除
5 ^* X- ~' m) A8 E5 w2 y2.用眼科剪剪成碎片
, ^, y3 ^; {' |$ t7 b0 v" w3.放在10倍左右体积的0.1%的2型胶原酶中37度消化半小时(震荡),我没用胰酶,因为感觉胰酶对细胞的损伤大5 I) Y6 ?& U, ^
4.稀释3倍后1600rps离心10min
- _8 _' R* n0 L0 O# }9 _4 V5.冲洗后再次1500rps离心8min
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henryjia

液体仍然很粘稠,此时过筛网肯定损失绝大部分细胞。
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6 }% U* B6 m* d( n我也遇到同样问题，稀释5倍左右冲洗后，把仍然较粘稠的培养液种植，后来发现有一瓶生长良好。另外2平很差。 正在尝试不同方法消化。' Q  W- X/ d0 o; h) n8 g2 Q9 u

. ?1 r; d" l  E7 p, \3 g1 b相信这是一个非常普遍的问题，斑竹是否可以给专题讨论，期待干细胞的分离？提前谢了。

vae有何不可

附一篇用酶进行消化和分离培养脐带干细胞的文章。

西瓜太郎

是不是你用胶原酶时间不够啊？一般单用胶原酶的都是消化过夜，还有就是你半小时后的消化液里含组织块的多么?有的时候要看消化的效果不是一味的追求时间，个人感觉是时间不够，细胞数消化下来的少结果当然就没了，胶原酶对细胞伤害小，可以消化时间长点。个人的一点意见   -- --
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sydfxt

回复 西瓜太郎 的帖子8 p1 Q# U# @! b
8 p1 \( l" W' B$ {. z
我觉得消化的还可以,组织块基本都消化没了,当然,为了减少消化液的量,下次决定加点胰酶进去

chb611301

我的方法是，用I型胶原酶消化过夜，再用胰酶消化5-10MIN ,然后用大量的生理盐水去洗涤 一般都用到500ml 以上去洗细胞，这样就不会太粘稠！离心收集后再用大体积重悬，此时再过筛，我自己做的时候觉得这样不会损失多少细胞！自己的一点体会啊