脐带干细胞如何分离

sydfxt

各位高手,我最近开始的取脐带干细胞,我的方法是:
7 \; n+ F* U! L; K% i8 W0 _- {2 H1.将脐带中的血管挑除
: f+ S" Q- x/ d$ F5 |2.用眼科剪剪成碎片
' d1 V+ j/ Q" P* }3.放在10倍左右体积的0.1%的2型胶原酶中37度消化半小时(震荡),我没用胰酶,因为感觉胰酶对细胞的损伤大
# R: a( u' {7 I. X- T5 z4.稀释3倍后1600rps离心10min
. Q& w. P' z3 _! Y4 n0 Z. [5.冲洗后再次1500rps离心8min" Q" x* `! a$ J  i5 C
6.然后过筛网,此时感觉液体仍然很粘稠...直接放培养瓶中培养
" q( x  a+ ^2 d$ M) W. z% _3 \$ j- f" b6 _. x
操作完后直接镜下观察结果发现没有细胞,这是怎么回事?我哪个环节出了问题,谢谢指点 * X( b7 z$ G  V! U8 |

sydfxt

各位高手,我最近开始的取脐带干细胞,我的方法是:6 z9 E# p2 Q/ D6 n2 U  b. E' I
1.将脐带中的血管挑除6 N% G3 c; m0 `9 w, `. f, H& j
2.用眼科剪剪成碎片
  G/ Z, X+ U8 J3.放在10倍左右体积的0.1%的2型胶原酶中37度消化半小时(震荡),我没用胰酶,因为感觉胰酶对细胞的损伤大
* s/ {8 z" T2 X5 F4.稀释3倍后1600rps离心10min
4 S# [& f' |% |3 p0 @+ Q5.冲洗后再次1500rps离心8min
/ w6 ^% S' c& `6 Y9 s6.然后过筛网,此时感觉液体仍然很粘稠...直接放培养瓶中培养
* t; t6 C4 o1 E. g' V5 R; y4 z3 I9 x, G! t) X8 M! f5 s
操作完后直接镜下观察结果发现没有细胞,这是怎么回事?我哪个环节出了问题,谢谢指点
. f$ T8 J' L/ v, D$ f2 k

henryjia

液体仍然很粘稠,此时过筛网肯定损失绝大部分细胞。 ( n, t; Z2 t1 k" E' l" A0 e
) D- _1 Q, G9 A7 O5 ?
我也遇到同样问题，稀释5倍左右冲洗后，把仍然较粘稠的培养液种植，后来发现有一瓶生长良好。另外2平很差。 正在尝试不同方法消化。2 a8 u" I5 b$ G% [& Q7 C# e

% a3 M/ x) m. k% o3 a9 L1 V& s相信这是一个非常普遍的问题，斑竹是否可以给专题讨论，期待干细胞的分离？提前谢了。

vae有何不可

附一篇用酶进行消化和分离培养脐带干细胞的文章。

西瓜太郎

是不是你用胶原酶时间不够啊？一般单用胶原酶的都是消化过夜，还有就是你半小时后的消化液里含组织块的多么?有的时候要看消化的效果不是一味的追求时间，个人感觉是时间不够，细胞数消化下来的少结果当然就没了，胶原酶对细胞伤害小，可以消化时间长点。个人的一点意见   -- --# D$ Q+ D0 z% F1 @2 q# q

sydfxt

回复 西瓜太郎 的帖子& `* S- P. j# o3 A3 H( U( Z

0 I6 J- i8 G9 b我觉得消化的还可以,组织块基本都消化没了,当然,为了减少消化液的量,下次决定加点胰酶进去

chb611301

我的方法是，用I型胶原酶消化过夜，再用胰酶消化5-10MIN ,然后用大量的生理盐水去洗涤 一般都用到500ml 以上去洗细胞，这样就不会太粘稠！离心收集后再用大体积重悬，此时再过筛，我自己做的时候觉得这样不会损失多少细胞！自己的一点体会啊