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作者：郭丽玮作者单位：130000长春市中心血站
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$ j6 t6 C" u( l9 C. t 【关键词】不同分离方法 脐带血造血干细胞分离 冷冻保存效果5 R/ a. K. A, \# F
脐带血造血干细胞的输注和移植治疗再生障碍性贫血、白血病及对恶性肿瘤放、化疗后辅助性治疗已引起广泛重视，而脐带血在血干细胞的分离和保存是脐带血造血干细胞输注和移植的关键，本文采用3种方法分离脐带血里白干细胞，并比较了不同方法的分离及冷冻保存效果。
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l, u+ l' S+ v8 ^2 U O 材料与方法
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9 X4 d; K$ i. V9 Q4 H4 P 脐带血的采集：无菌条件下，将新生儿已经结扎的脐带进行脐静脉穿刺，取脐带血。
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6 H4 m6 C4 j% f- O; @$ _ 冷冻保护剂：取DMSO缓慢加入1640液中摇匀，配成含20%DMSO的1640保护液。0 u0 Y% `9 n8 M( \; M) k, z
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细胞分离液：①6%右旋糖酐：分子量20～30万。②泛影葡胺聚蔗糖淋巴细胞分离液：比重1.007。
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6 u G& d- F) q* E: [, a 分离：Ⅰ：离心法。Ⅱ：沉降法。Ⅲ：淋巴细胞分离液法。/ ^! D( h/ d: J0 m/ x
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" t$ B+ I6 v% `0 j" E) X, a* m( H 冻存：样品用程控降温仪降温。降温速率为从4℃到-30℃每分钟1℃，从-30℃到-80℃每分钟3℃。液氮气箱中平衡2小时，放入液氮液箱保存。- z# [% e$ D9 ]0 v& b" @1 b& d$ V
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/ j1 I. v; N' E$ m 复温：40℃水浴快速复温。1 w0 x& {/ Y. _) j+ V) P3 O
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! K0 e7 k# H" C% W, B5 S 检测：单个核细胞计数，台盼兰拒染率，GM-CFUC培养。以上检测均用常规方法。
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结果
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& W8 U( m0 i/ |1 g 3种分离方法分离的脐带血造血干细胞冻前的台盼兰拒据染率及冻存后的核细胞分离液法的有核细胞回收率分别是：90.4±3.8%（Ⅰ），90.6±3.3%（Ⅱ），85.4±3.4%（Ⅲ）。检验表明，Ⅲ组的有核细胞回收率低于Ⅰ组（P＜0.05）和Ⅱ组（P＜0.05）。冻存前台盼兰拒染率分别是：Ⅰ组98.2±0.8%、Ⅱ组97.9±0.8%、Ⅲ组98.2±0.9%，3组比较亦无显著差别。
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GM-CFU-C回收率分别是：Ⅰ组80.5%，Ⅱ组81.6%，Ⅲ组61.2%。Ⅲ组的GM-CFU-C回收率低于Ⅰ组和Ⅱ组（P＜0.05）。
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讨论
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% R+ t- L6 H& v9 }1 U& m4 q$ ` 脐带血造血干细胞移植已引起广泛重视，国外亦有人对其采集及不同条件下造血干细胞的存活情况进行了研究。
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本文讨论的3种方法，Ⅰ组（离心法）虽然冻存后有核细胞回收率及GM-CFU-C的回收率较高，但分离出的细胞总数较少。Ⅲ组（淋巴细胞分离液）两个回收率较低。而Ⅱ组（沉降法）分离出的单个核细胞数量较多，两个回收率都比较高，是分离脐带血造血干细胞比较理想的方法。 |
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发表于 2009-3-3 12:38
发表于 2010-3-23 15:04
